乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-V1)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-V1)厂家在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-V1)厂家
等级：科研试剂
英文名：IFVB-V1 PCR Detection Kit
规格：48次/盒
品Pai：百奥莱博
编号：SYA196

乙型流感病毒分型荧光PCR检测试剂盒(IFVB-V1)厂家极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·猪链球菌病(PSS)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA443
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·禽流感H7N7病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA157
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·流感N9亚型病毒(AIV-N9)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA531
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽滑液支原体单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA390
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·口蹄疫A型(FMDV-A)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA477
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·金黄色葡萄球菌肠毒素B单重荧光PCR检测试剂盒（定性/定量）
编号：SYA041
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对金黄色葡萄球菌肠毒素B特异性引物，对金黄色葡萄球菌肠毒素B DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途：
该试剂盒适合于检测水样粪便、疑似污染物的水、食物等样本中的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)，用于金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
金黄色葡萄球菌PCR反应液(SEB-PCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 107copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 106copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 105copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 104copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 103copies/μL) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、PCR仪器适用范围
ABI系列，Roche系列等PCR检测仪等。

六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
6.1.1 食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10-2010)要求进行。
6.1.2 粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
6.1.3 病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
 注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
6.2.1液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.2.2固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.2.3 粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
6.2.4 其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
 注：建议采用相关标准方法进行前增菌，并按照6.2.1方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qPCR反应液(SEB-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(SEB-PTC103、104、105、106、107copies/μL)5μL(建议由低浓度向高浓度顺序加入反应液，避免高浓度阳性对照品污染反应液)，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(SEB-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明SEB核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明SEB核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行SEB qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明SEB核酸阳性；否则判为样本阴性。
（5） 标准曲线相关系数数值介于0.97~1之间。(相关系数数值等同于r2值)，根据斜率及Y轴截距列出计算公式，并通过标准曲线计算样品RNA含量拷贝数。
例如：Y轴截距=41.5 斜率=-3.83
公式为：Y=-3.83(logX)+41.5

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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·霍乱弧菌毒素共调菌毛亚单位基因(tcpA)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA076
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·病毒性出血性败血症(VHS)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA512
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·冠状病毒(NL63)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA182
英文名称：NL63 PCR Detection Kit
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·新冠状病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA192
英文名称：NL63 PCR Detection Kit
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽J亚型禽白血病病毒(ALV－J)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA364
英文名称：NL63 PCR Detection Kit
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对禽J亚型禽白血病病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用一步法荧光RT-PCR技术对禽J亚型RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中禽J亚型禽白血病病毒的探针报告基团为FAM。

二、用途：
该试剂盒适合于检测的全血、带有白血细胞的血浆或血清、、肝脏、肾脏等样本中禽J亚型禽白血病病毒(ALV-J)的特异性检测。适用于禽J亚型禽白血病病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
禽J亚型禽白血病荧光qRT-PCR反应液(ALV-J-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(ALV-J-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(ALV-J-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(ALV-J-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(ALV-J-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明ALV-J核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明ALV-J核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行ALV-J qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明ALV-J核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。




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