快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)厂家，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)厂家
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
编号：WE0142
规格：5ml
  本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效YZ了非特异产物的产生，并显著提高PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序，可适用于无需ROX校正的所有荧光定量PCR仪。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0141)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0142)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0143)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

 

组份	WE0141-5ml	WE0142-5ml	WE0143-5ml
2×BaFaSYBR Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaFaSYBR Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定ZJ的模板使用量。
3)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX.

2、PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	20 s
变性	95℃	3 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	30 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、20s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。若高温处理时间过长，会对酶的活性造成影响。可根据模板情况确定ZJ的预变性时间。
2)建议采用两步法PCR反应程序，退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

关于快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·GXcDNADY链合成试剂盒
编号：WE0131
英文名称：MMLV cDNA Synthesis Kit
规格：100次
  本试剂盒是专为两步法RT-PCRDY步实验配制的cDNADY链合成试剂盒。本产品包含从RNA模板逆转录成cDNADY链所需的所有试剂，其中包括MMLV逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等。经过突变改造的MMLV逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解，更容易获得全长的cDNA。MMLV逆转录酶热稳定性强，可得高产量的cDNA，使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高，适用各种PCR反应的DNA聚合酶。

试剂盒组成：

组份	100次
MMLV，200 U/μl	100μl
5×RT Buffer	500μl
Primer Mix	240μl
dNTP Mix，2.5 mM Each	500μl
DTT，0.1 M	240μl
RNase-Free Water	1ml

产品特点
1、RNase H-：经突变的MMLV逆转录酶，RNase H活性缺失，更易获得全长cDNA。
2、使用方便：试剂盒包含除RNA模板外的逆转录所需全部试剂。

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、若起始RNA的量小于50ng，建议加入RNA酶YZ剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。

操作步骤：
注意：10ng-5μg总RNA可建立20μl反应体系，如果总RNA量大于5μg，请按比例扩大反应体系。

I．逆转录操作步骤：
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为20μl。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	1ng-5μg
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
MMLV，200 U/μl	1μl
RNase-Free Water	up to 20μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶YZ剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
5、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

II．若逆转录效率低，或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时，建议采用以下步骤：
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系，总体积为13μl 。
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each	4μl	500μM Each
Primer Mix	2μl
RNA Template	Xμl	1ng-5μg
RNase-Free Water	up to 13μl

3、70℃孵育10分钟，迅速冰浴2分钟。
4、短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、继续向以上反应液中加入以下试剂：
 

试剂	20μl反应体系	终浓度
5×RT Buffer	4μl	1×
DTT，0.1 M	2μl	10 mM
MMLV(200U/μl)	1μl

注意：
1)若起始RNA的量小于50ng，则建议加入RNA酶YZ剂(RNasin)。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。

6、轻轻吹打混匀，42℃孵育50分钟，85℃孵育5分钟。
7、反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
8、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)厂家关键词：WE0142,BaFaSYBR Mixture(Low ROX),快速实时荧光定量PCR预混体系(低含量ROX校正染料)

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BL0787 人IgG抗原(干粉)
7725-54-0 Ammonium Persulfate   过硫*(代"酸")胺
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