特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
北京百奥莱博供应的WE0222型无毒RNA酶清除剂品Pai用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多无毒RNA酶清除剂等分子生物学试剂产品请联系我司咨询订购。
名称:WE0222型无毒RNA酶清除剂品Pai
规格:100ml
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:WE0222
本产品是一种GX的RNase灭活清洁剂。它含有多种成分,能GX灭活玻璃、塑料表面的 RNase污染,保障工作环境的清洁。本产品效力和速度远远高于常用的DEPC,可在5分钟内将固体表面的多达100μg的RNase彻底灭活。经RNase清除剂清洗过的容器、实验台面、枪头、电泳槽等,可确保不含RNase污染。
产品特点
1、无毒的RNase灭活剂;
2、可代替DEPC,去除固体表面的RNase。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、使用前请检查本产品是否出现沉淀,如有沉淀,请将溶液置于 37℃水浴重新溶解。
2、RNase 清除剂可直接使用,请勿稀释,稀释后会降低灭活效力。
3、操作人员在使用RNase 清除剂过程中要戴手套,避免皮肤直接接触。使用喷洒瓶时请戴口罩并在通风橱等通风环境下 进行,以防对人产生刺激。
4、请勿将RNase 清除剂用在易腐蚀的金属表面。
使用方法:
一、用RNase清除剂处理工作平台
直接将RNase清除剂喷于台面,普通吸水纸擦净,用水冲洗干净后用吸水纸擦净,晾干。
二、用RNase清除剂处理实验仪器
用浸有RNase清除剂吸水纸擦拭仪器表面,用水冲洗干净后用吸水纸擦干。 一些小的仪器部分可直接浸泡在RNase清除剂溶液中,用水冲洗干净后用吸水纸擦干。
三、用RNase清除剂处理玻璃和塑料器皿
将器皿浸泡在RNase清除剂溶液中或将RNase清除剂溶液喷洒在器皿表面,再用蒸馏水冲洗两次,倒立晾干后备用。如处理离心管可直接将RNase清除剂溶液加入离心管中,进行涡旋震荡,离心后去除RNase清除剂溶液,蒸馏水 冲洗两次,晾干后备用。
四、用RNase清除剂处理移液枪
根据生产厂家的使用手册卸下移液枪的前端, 留下接口塞和圈套后将其浸泡在RNase清除剂中,再用水冲洗干净, 晾干,将移液枪按使用手册组装好。
储存条件:室温(15~30℃)
想要了解更多关于WE0222型无毒RNA酶清除剂品Pai的价格、品Pai、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·高纯质粒小提试剂盒
编号:WE0162
英文名称:PlaPure Mini Extraction Kit
规格:50次|200次
本试剂盒提供一种简单、快捷、GX的提取质粒的方法,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方,通过离心吸附柱在高盐状态下GX专一的结合溶液中的质粒DNA,经过两步洗涤,一步洗脱,ZD限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 | 200次 |
Buffer P1 | 15ml | 60ml |
Buffer P2 | 15ml | 60ml |
Buffer N3 | 20ml | 80ml |
Buffer PB | 10ml | 35ml |
Buffer PW(浓缩液) | 6ml | 25ml |
Buffer EB | 10ml | 30ml |
RNase A(10mg/ml) | 150μl | 600μl |
吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
自备试剂:无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2~8℃可保存更长时间,加入RNase A的Buffer P1 置于2~8℃可稳定保存6个月。
2、DY次使用前,将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中,混匀,置于2–8℃保存,使用前需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。
3、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
5、注意不要直接接触Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB,使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤:
1、取1-5ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中,13000rpm(~~16200×g)离心30秒收集菌体沉淀,尽量吸弃上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮菌体沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,导致提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250μl Buffer P2,温和地上下颠倒混匀4-6次,充分混匀使菌体裂解,此时溶液应变得清亮粘稠。
注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。此步骤所用时间应不超过5分钟,避免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350μl Buffer N3,立即温和地上下颠倒混匀8-10次,充分混匀,此时应出现白色絮状沉淀。13000rpm离心5分钟。
注意:Buffer N3加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
5、将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱DM中,13000rpm离心30秒钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入150μl Buffer PB,13000rpm离心30秒。
7、向吸附柱中加入400μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。
8、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附膜的中间部位加入50-100μl Buffer EB,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意:
1)为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时, Buffer EB在65-70℃水浴预热,可以增加提取效率。
储存条件:室温(15~30℃)。
WE0222型无毒RNA酶清除剂品Pai关键词:RNase Removal,无毒RNA酶清除剂,WE0222
·血液RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号:WE0197
英文名称:RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I)
规格:50次
本试剂盒适用于从新鲜全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)中提取总RNA,可处理多至1.5ml的全血,洗脱得到分子量大于200 bp的高纯度RNA,多个样品可以在1小时内同时完成。本产品无需CsCl纯化的超离心步骤和LiCl或乙醇沉淀,不含有*酚或*仿等有毒溶剂,经过纯化的RNA有效去除血红素、肝素等酶YZ剂和污染物,可直接用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成: 组份 | 50次 |
DNase I | 1000 U |
10×Reaction Buffer | 1000μl |
Buffer RBL(10×) | 60ml |
Buffer RL | 35ml |
Buffer RW1 | 40ml |
Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
RNase-Free Water | 10ml |
过滤柱FL及收集管 | 50套 |
吸附柱RM及收集管 | 50套 |
RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:β-巯基乙醇、无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融,否则影响提取RNA提取得率和质量。样品在Buffer RL中,可于-70℃保存一个月。
3、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
4、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer RL是否出现结晶或者沉淀,可置于于56℃水浴重新溶解。
6、本试剂盒不能用于加入抗凝剂的冷冻血液样本RNA的提取。
7、10×Buffer RBL需在使用前将溶液用无RNase的水进行10倍稀释,稀释后置于2~8℃保存。
操作步骤:
1、向新鲜的抗凝全血样本中,加入5倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍),轻轻涡旋或颠倒混匀。冰上孵育10-15分钟,孵育过程中混匀两次。
注意:孵育过程中浑浊的悬液会变成透明,证明红细胞被裂解,必要时可以把孵育时间延长至20分钟。
2、4℃ 2,100 rpm(~400×g)离心10分钟,小心吸弃上清。
3、向以上沉淀中加入2倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍),轻轻涡旋,充分重悬沉淀。
4、4℃ 2,100 rpm离心10分钟,小心并彻底吸弃上清。
注意:此步一定要完全去除上清否则影响裂解导致RNA产量下降。
5、向沉淀中加入Buffer RL(使用前检查是否已经加入β-巯基乙醇),具体加量按照下表进行,涡旋混匀。
注意:如果血液不是健康人的全血,需要根据血液中白细胞的数量来确定所需Buffer RL的加入量。完全混匀后细胞应完全裂解,块状沉淀消失。 Buffer RL(μl) | 健康人类全血(ml) | 白细胞数量 |
350 | 小于0.5 | 多至2×106 |
600 | 0.5-1.5 | 2×106 至1×107 |
6、将以上所得液体转移到已装入收集管的过滤柱中,12000rpm(~~13400×g)离心2分钟,收集滤液,弃掉过滤柱。
7、向滤液中加入1倍体积(600μl或350μl)的70%乙醇(无RNase水配制),混匀。
注意:加入乙醇后可能会产生沉淀,不会影响后续实验。
8、将上步所得溶液全部加入到吸附柱中(已装入收集管),若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心15秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
10、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
11、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
12、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
13、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心15秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
14、重复步骤13。
15、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
16、将吸附柱置于一个新的RNase-Free的1.5ml离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water再次洗脱,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟。
储存条件:室温(15~30℃)。
WE0222型无毒RNA酶清除剂品Pai关键词:RNase Removal,无毒RNA酶清除剂,WE0222
·His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)
编号:WE0267
英文名称:His-Tagged Protein Purification Kit(Soluble Protein)
规格:5ml
本试剂盒包含Ni-Agarose填料、亲和柱空柱以及可溶性His融合蛋白纯化所需的全部试剂(细菌裂解液、蛋白酶YZ剂混合物、结合缓冲液和洗脱缓冲液组分),使用方便。该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力,能够GX一步纯化带有6个组*酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点,较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固,有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力,提高纯化效率。较高的基团密度,大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下,对来源于各种表达系统(如杆状病毒,哺乳细胞,酵母以及细菌)中的His标签蛋白,均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子,可直接用可溶性蛋白的纯化,使用方便,快捷。
镍柱参数:
支持物:CL-6B琼脂糖凝胶
载量:20-30 mg His标签蛋白/ml填料
粒径:50-160μM
试剂盒组成: 组份 | 5ml |
Ni-Agarose Resin | 5ml |
Bacterial Protein Extraction Reagent | 65ml |
1 M Tris-HCl(pH7.9) | 15ml |
1 M Imidazole | 65ml |
3 M NaCl | 120ml |
Protease Inhibitor Cocktail | 700μl |
吸附柱(12ml) | 一套 |
保存条件:Protease Inhibitor Cocktail,-20℃;Ni-Agarose Resin,2~8℃,避免冷冻;其它组分,2~8℃
注意事项:
1、在纯化之前采用电泳检测蛋白的可溶性,本试剂盒只适合于可溶性蛋白的纯化,如需纯化包涵体蛋白,请选择我公司的包涵体蛋白纯化试剂盒,货号为WE0266。
2、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT和EDTA。
3、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
4、为提高纯化效率,首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的ZJ使用浓度。必要时可以使用线性或梯度浓度的咪唑浓度,Binding Buffer的范围为0-10 mM,洗脱缓冲液的范围为10-500 mM来进行。并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
5、请使用高纯度的试剂配制缓冲液,并通过0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。为避免柱子被堵塞,建议将裂解液进行离心,或者使用0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。
6、柱再生时,保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。
使用方法:
I 缓冲液的准备
可溶性蛋白纯化缓冲液配方: 组份 | Tris-HCl(pH7.9) | Imidazole | NaCl |
Soluble Binding Buffer | 20 mM | 10 mM | 0.5 M |
Soluble Elution Buffer | 20 mM | 500 mM | 0.5 M |
II 组装层析柱
1、将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱,室温静置10分钟,待凝胶与溶液分层后,把底部的出液口打开,让乙醇通过重力作用缓慢流出。
注意:
1)填料的上层是乙醇保护层,将填料和乙醇一起混匀,以每ml填料纯化20-30mg His标签蛋白计算,取需要的填料与乙醇的混合液加入层析柱。
2)如果乙醇不流出,可以给柱子一个外力,例如用大拇指对柱口轻轻按压一下,迫使乙醇流出。
3)本实验都是通过重力作用使溶液流出。
2、向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后,再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子,平衡结束后即可上样。
注意:柱体积指的是填料的体积。
III 可溶性蛋白的纯化
1、收集菌体后,每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml细菌裂解液(每1ml 细菌抽提试剂中已加入10μl 蛋白酶YZ剂混合物),超声裂解菌体。
注意:
1)当提取物粘度高或提取蛋白为包涵体时,建议加入DNase I和Lysozyme。每1ml 细菌抽提试剂中加入1μl DNase I(1000U/ml),2μl Lysozyme(50 mg/ml),DNase I和Lysozyme可单独从我公司购买,货号:Lysozyme(#WE0214)、 DNase I(#WE0213A),如使用其它公司产品,请按照相应说明书操作。
2)超声过程中保持菌液处于冰浴中,超声条件依赖于所使用的超声仪功率,探头种类,容器的大小形状,需实验中自己摸索,应避免连续超声导致的大量产热,可分成短时间,多次超声,通过一定的间隔时间避免溶液过热。ZZ菌液变清即可。
2、10000 rpm,4℃离心3分钟,收集上清中的可溶性蛋白。
3、用Binding Buffer将菌体裂解液等倍稀释后负载上柱,流速为10倍柱体积/小时,收集流穿液。
注意:
1)本试剂盒中附带有一块筛板,使用时先将筛板加至填料的上层,该筛板可用于杂质较多的蛋白的过滤,防止过多的杂蛋白堵塞柱子的作用。再将处理好的样品负载上柱,但是筛板放入柱子后就不易取出。
2)通过控制加入的菌体裂解液的速度来控制流速。
4、使用15倍柱体积的Soluble Binding Buffer冲洗柱子,洗去杂蛋白。
5、使用适量Soluble Elution Buffer洗脱,收集洗脱峰。
注意:洗脱峰可以分管收集,每1ml收集1管,并采用蛋白监测仪监测,收集洗脱峰。
6、洗脱后,依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子,再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没),封柱后2~8℃保存。
注意:如果是分段梯度洗脱,ZD洗脱缓冲液中咪唑浓度未达到500 mM时,则使用浓度为500 mM的咪唑进行洗脱10倍柱体积后,再进行第6步的操作。
Ⅳ 柱再生
当填料使用多次后,结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色),可以用以下方法再生,提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用2倍柱体积的6 M盐*(代"酸")胍冲洗后,使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2、使用1倍柱体积的2% SDS冲洗。
3、依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积的100%乙醇冲洗,再依次使用1倍柱体积的75%、50%和25%的乙醇冲洗。
4、使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5、使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。
6、使用3倍柱体积去离子水,3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7、2~8℃保存。
8、再次使用前,需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗,然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生,3个柱体积的Binding Buffer平衡。
储存条件:-20℃
我公司强烈推荐分子生物学试剂系列产品,热情期待您的咨询选购WE0222型无毒RNA酶清除剂品Pai。
温馨提示:不可用于临床ZL。