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北京现货WE0192型超纯RNA提取试剂盒打折促销的品Pai:百奥莱博,是优质的RNA纯化产品,用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多超纯RNA提取试剂盒等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称:北京现货WE0192型超纯RNA提取试剂盒打折促销
规格:50次|200次
英文名:SuperPure RNA Extraction Kit
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:WE0192
本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒,裂解液充分裂解并匀质化样本,采用独特的硅基质膜吸附技术,通过离心吸附柱在高盐状态下GX专一的结合溶液中的RNA,同时ZD限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等;可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA,每次可处理 30-50 mg组织或5×106细胞,可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 |
TRIzon Reagent | 60ml |
Buffer RW1 | 40ml |
Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
RNase-Free Water | 10ml |
吸附柱RM及收集管 | 50套 |
RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:TRIzon Reagent 2~8℃避光保存,其他组分室温(15~30℃)。
自备试剂:*仿(新开封或提取RNA专用)、70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。
产品特点:
1、纯度高:ZD限度除去蛋白质等杂质,提取的RNA可直接用于下游各种实验。
2、提取量大:独特的裂解液配方,充分裂解细胞或组织,RNA提取量多至100μg。
3、快速:步骤少,操作简单,节省时间。
4、兼容性强:适用于多种动植物组织和细胞RNA的提取。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
3、使用前若发现TRIzon Reagent有沉淀,可置于56℃水浴几分钟,即可溶解。
4、DY次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。
6、若下游实验对DNA非常敏感,建议用不含RNase的DNase I(货号:WE0213S)对RNA进行处理。
操作步骤:
1、样品处理
①植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon Reagent中迅速研磨,每30-50 mg组织加入1ml TRIzon Reagent,混匀。
注意:样品体积一般不要超过TRIzon Reagent体积的10%。
②动物组织:取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎,每30-50 mg组织加入1ml TRIzon Reagent,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon Reagent 1ml混匀。
注意:样品体积一般不要超过TRIzon Reagent体积的10%。
③单层培养细胞:吸去培养液,可直接在培养板中加入适量TRIzon Reagent(每10cm2 面积需要1ml TRIzon Reagent),用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后,将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中,300×g离心5 min,收集细胞沉淀,仔细吸除所有上清,加入TRIzon Reagent 1ml混匀。
注意:
1)收集细胞数量不要超过1×107。
2)TRIzon Reagent加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定。如果TRIzon Reagent加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染。
3)收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则会导致裂解不完全,造成RNA的产量降低。
④细胞悬液:离心收集细胞。每5×106-1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml TRIzon Reagent。
注意:
1)加入TRIzon Reagent前不要洗涤细胞,以免RNA降解。
2)一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。
⑤血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积的TRIzon Reagent(推荐0.25ml全血加入0.75ml TRIzon Reagent),充分振荡混匀。
⑥可选步骤:对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品,如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎,可以在匀浆处理后4℃,12000rpm(~~13400×g)离心10分钟以除去不溶物质,此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA,而RNA存在于上清中。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次,使样本充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
3、以每1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿的比例加入*仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2分钟。
4、4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心10分钟,此时样品分为三层:红色有机相,中间层和上层无色水相,RNA主要在上层水相中,将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制),颠倒混匀。
6、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入700μl Buffer RW1,12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、重复步骤8。
10、12000rpm离心2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤11。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤11。
储存条件:室温(15~30℃)。
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