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北京WE0239型T4 DNA连接酶多少钱是高品质的工具酶产品,由北京百奥莱博供应,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多T4 DNA连接酶等工具酶产品请联系我司咨询订购。
名称:北京WE0239型T4 DNA连接酶多少钱
英文名:T4 DNA Ligase
编号:WE0239
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:100U|500U
T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的,催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接,还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接,以及线性DNA的自身环化。
产品组成:
组份 | 100U | 500U |
T4 DNA Ligase,5 U/μl | 20μl | 100μl |
10×Ligation Buffer | 150μl | 750μl |
50%PEG Solution | 150μl | 750μl |
实验前准备及重要注意事项1、T4 DNA Ligase的ZZ用量不要超过推荐的用量,否则影响连接效率。
2、PEG可以极大提高平末端的连接效率,我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率,建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油,比较粘稠容易挂壁,建议使用之前短暂离心将液体收集到管底,取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。
使用方法:
一、粘性末端的连接:1、按以下体系配制反应液:
组份 | 20μl体系 | 终浓度 |
线性载体DNA | Xμl | 20-100ng |
插入DNA片段 | Yμl | 插入片段:载体1:1-5:1 |
10×Ligation Buffer | 2μl | |
T4 DNA Ligase,5 U/μl | 0.2μl | 1 U |
ddH2O | 补充至20μl | |
2、涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:22℃孵育10分钟。
4、瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
二、平末端的连接:1.反应体系:
组分 | 20μl体系 | 终浓度 |
线性载体DNA | Xμl | 20-100ng |
插入DNA片段 | Yμl | 插入片段:载体1:1-5:1 |
10×Ligation Buffer | 2μl | |
T4 DNA Ligase,5 U/μl | 1μl | 5 U |
50%PEG Solution | 2μl | 5% |
ddH2O | 补充至20μl | 20μl |
2、涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:22℃孵育1小时。
4、瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
三、线性DNA的自身环化:1、反应体系:
组分 | 50μl体系 | 终浓度 |
线性载体DNA | Xμl | 5-50ng |
10×Ligation Buffer | 5μl | |
T4 DNA Ligase,5 U/μl | 1μl | 5 U |
ddH2O | 补充至50μl | 50μl |
2、涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件:粘性末端22℃孵育10分钟;平末端22℃孵育1小时。
4、瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
储存条件:-20℃。
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北京WE0239型T4 DNA连接酶多少钱关键词:T4 DNA连接酶,WE0239,T4 DNA Ligase
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北京WE0239型T4 DNA连接酶多少钱关键词:T4 DNA连接酶,WE0239,T4 DNA Ligase
·Protein A琼脂糖凝胶
编号:WE0271
英文名称:Protein A-Agarose
规格:5ml
本产品可从血清,腹水,细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体 Fc片段的基因工程重组蛋白。具有高IgG结合特异性,高流速,低Protein A-Agarose脱落等特点。
注意事项:
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱,避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1,长径比过大将导致洗脱峰拖尾,洗脱体积增大;长径比过小将导致样品与填料接触时间短,吸附不充分,填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高,应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml,抗体浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短,洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性,以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后,应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理,长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。
使用方法:
I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液:纯化不同动物和不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是不同的,部分参照如下。
抗体 | 平衡缓冲液成分 |
人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b | 20 mM PBS,300 mM NaCl,pH7.4-8.5 |
人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3 | 50 mM Tris-Cl,3 M NaCl,pH7.8-8.5 |
2、洗脱缓冲液:0.1 M柠檬酸*缓冲液,pH4.0。
3、再生缓冲液:1 M NaCl。
4、中和缓冲液:1 M Tris-Cl,pH9.0。
注意:
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。
II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰,去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意:样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。
III
操作步骤1、将Protein A-Agarose填料混匀后加入层析柱,室温静置10分钟,待凝胶与溶液分层后,把底部的出液口打开,让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净,用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱,上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积,直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱,收集洗脱峰,用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2~8℃保存。
注意:收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中,ZH根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积,再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积,再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2~8℃保存。
储存条件:2~8℃,避免冷冻
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温馨提示:不可用于临床ZL。