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名称:耐热型MMLV逆转录酶(无RNase H活性)
编号:BTN131210
品Pai:百奥莱博
规格:10000U
英文名:Thermal Stable MMLV Reverse Transcriptase (H-)
产地:国产|进口
本产品为点突变型M-MLV逆转录酶(RNase H缺失),拥有RNA和DNA聚合酶活性,但由于在RNase H结构域内进行了点突变,该酶缺少RNase H的活性,不会降解DY链CDNA 合成时形成的RNA-DNA 复合物中的RNA,从而可以从长模板中获得高产量的全长cDNA。缺失了RNase H活性的逆转录酶为长cDNA的制备及包含高比例全长cDNA的文库制备提供了更好的选择。
产品特点:
1.温度稳定性,点突变产物的热稳定性可防止与二级结构相关的问题,增强了与模板的亲和力。
2.能够在较宽的温度范围内保持活性,在42-45℃之间具有ZJ活性,在温度高达55℃时仍有活性。
3.聚合酶活性增强,本产品与其它缺失突变得到的M-MLV 逆转录酶相比,具有更高的cDNA产率。
4.高产量制备全长的DY链cDNA,最长可达13kb。合成时可掺入带有修饰的核苷酸(例如 Cy3-、Cy5-、罗丹明-、*基烯丙基-、荧光素-标记的核苷酸)。
5.广泛的工作范围:提高了逆转录的性能,使得可以在更广泛的酶浓度和底物浓度的条件下工作。
产品组成:
成分 | 规格 |
耐热型MMLV逆转录酶(H-),200U/μL | 50μl |
5×RT Buffer | 1ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:1.在无RNase的PCR管中加入如下成分:
成分 | 用量 |
▶RNA模板 |
Total RNA 或poly(A)RNA 或specific RNA | 0.1ng-5μg 10pg-500ng 0.01 pg-0.5μg |
▶引物 |
Oligo dT18 或随机引物 或基因特异引物 | 0.5μg(100pmol) 0.2μg(100 pmol) 15-20 pmol |
▶RNase-free水 | Up to 12.5μL |
2.对富含二级结构的高GC RNA模板,65℃保温5分钟后迅速冰浴2-10分钟。
3.离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。
4.按顺序向上述反应液中加入下表各成分,反应终体积为20μL:
5×RT Buffer | 4μL |
RNase Inhibitor | 0.5μL(20U) |
dNTP Mix,10mM each | 2μL(终浓度1mM) |
耐热型MMLV逆转录酶(H-) | 1μL(200U) |
轻柔混匀,短暂离心。
5.42℃保温60分钟(Oligo dT18或基因特异引物);如果是随机引物则先在25℃保温10分钟,然后再转移至42℃保温60分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板保温温度可以设为55℃。
6.70℃保温10分钟终止反应后置冰上冷却,得到cDNA。该产物可直接用于PCR扩增或-20℃保存。
关键词:Thermal Stable MMLV Reverse Transcriptase (H-),耐热型MMLV逆转录酶(无RNase H活性),BTN131210
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温馨提示:不可用于临床ZL。