特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
WE0289型SDS-PAGE上样缓冲液(非还原,5×)打折促销的品Pai:百奥莱博,是优质的蛋白质研究产品,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多SDS-PAGE上样缓冲液(非还原,5×)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。
名称:WE0289型SDS-PAGE上样缓冲液(非还原,5×)打折促销
编号:WE0289
规格:5×2ml
品Pai:百奥莱博
SDS-PAGE上样缓冲液(非还原,5×)是以*酚蓝为染料,5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液,应用于非还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。
注意事项:
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀。
2、本品不含还原剂如巯基乙醇或DTT。
3、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体ZL。
操作步骤:
1、将SDS-PAGE上样缓冲液(非还原,5×)与蛋白样品按照1:4的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温,以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4、离心后,以取适量上清,直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。进行常规电泳。
储存条件:-20℃
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·植物基因组DNA提取试剂盒
编号:WE0173
英文名称:Plant Genomic DNA Extraction Kit
规格:50次|200次
本试剂盒适用于从植物组织和植物干粉中提取总DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA以及叶绿体DNA。本品可以处理多至100 mg的样本,可纯化获得ZD为50 kb的DNA,多数片段在20-30 kb之间。本试剂盒采用先进的硅胶膜技术和简单的离心程序,无需乙醇沉淀,简单快速地分离得到高纯度的DNA,有效去除PCR和其他酶促反应的YZ剂。本品可以在1小时内完成总DNA的提取, 纯化得到的DNA可以直接用于酶切、 PCR、 Real-Time PCR、 文库构建、 Southern Blot、分子标记等下游实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 | 200次 |
Buffer GP1 | 40ml | 160ml |
Buffer GP2 | 40ml | 160ml |
Buffer GW1(浓缩液) | 13ml | 52ml |
Buffer GW2(浓缩液) | 15ml | 50ml |
Buffer GE | 15ml | 60ml |
吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
自备试剂:β-巯基乙醇、*仿、无水乙醇。
注意事项:
1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2、Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer GP1加1μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer GP1室温可保存1个月。
3、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GP1和Buffer GP2是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GP1和Buffer GP2于65℃水浴重新溶解。
5、如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer GP1孵育后,加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml),RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0225S。
操作步骤:
1、取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约20 mg,加入液氮充分研磨。
2、将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中,加入700μl 65℃预热的Buffer GP1(使用前在预热的Buffer GP1中加入β-巯基乙醇,使其终浓度为0.1%),迅速颠倒混匀后,将离心管置于65℃水浴20分钟,水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。
注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号:WE0225S),震荡混匀,室温放置5-10分钟。
3、加入700μl *仿,充分混匀,12000rpm(~~13400×g)离心5分钟。
4、小心将上层水相转入一新的离心管(自备)中,加入700μl Buffer GP2,充分混匀。
5、将步骤4中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7.
8、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤9;若洗脱体积小于100μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。
WE0289型SDS-PAGE上样缓冲液(非还原,5×)打折促销关键词:SDS-PAGE上样缓冲液(非还原,5×),SDS-PAGE Loading Buffer(non-Reducing,5×),WE0289
·抗GFP标签多克隆抗体
编号:WE0347
英文名称:Anti GFP-Tag Rabbit Polyclonal Antibody
规格:100μl
GFP或其突变体EGFP与目的蛋白融合表达常用于检测目的蛋白的表达和分布。该抗体特异识别GFP以及EGFP等一些突变体。
抗体类型:亲和纯化兔多克隆抗体IgG
免疫原:人工合成多肽
应用范围:WB(1:1000-5000)、ELISA(1:1000-20000)
·BL21(DE3)pLysS感受态细胞
编号:WE0254
英文名称:BL21(DE3)pLysS Competent Cell
规格:100μl×10支
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。该菌株携带pLysS质粒,具有*霉素抗性,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。使用pUC19质粒检测,转化效率可达107。
产品组成:
组份 | 0.1ml×10支 |
BL21(DE3)pLysS Competent Cell | 10×100μl |
Control DNA pUC19,0.1ng/μl | 10μl |
实验前准备及重要注意事项1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供对照试验使用。
使用方法:
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意:
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
储存条件:-80℃。
WE0289型SDS-PAGE上样缓冲液(非还原,5×)打折促销关键词:SDS-PAGE上样缓冲液(非还原,5×),SDS-PAGE Loading Buffer(non-Reducing,5×),WE0289
·GX热启动DNA聚合酶
编号:WE0123
英文名称:SuperStar DNA Polymerase
规格:500U|2500U
本产品是一种采用ZX封闭技术的Taq DNA Polymerase,适用于HotStart PCR。在70℃以下,酶的活性ZX被完全封闭,有效YZ了聚合酶活性,并能够在低温条件下有效YZ引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。在95℃条件下孵育5分钟后,酶的部分活性得以释放。随着热循环的不断进行,剩余的酶活会源源不断地释放出来,这就使得此酶克服了常规Taq酶容易出现平台期的弊端,其扩增效率大大提高。
本品进行PCR扩增时,PCR产物3"末端附有一个“A”碱基,可直接用于T/A克隆。本产品具有扩增速度快、特异性好、稳定性好的特点,主要应用于对扩增产物要求量大的PCR和RT-PCR反应。
产品组成:
组份 | 500U | 2500U |
SuperStar DNA Polymerase,5 U/μl | 100μl | 5×100μl |
10×PCR Buffer | 1.8ml | 5×1.8ml |
注意:本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。
活性定义:用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
2、经检测无外源核酸酶活性;
3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
10×PCR Buffer | 5μl | 1× |
dNTP Mix,10 mM each | 1μl | 200μM each |
Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50 μ l |
SuperStar DNA Polymerase,5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
ddH2O | up to 50μl | |
注意: 可以在室温下配制反应液,将试剂置于冰上。引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 5 min | |
变性 | 94℃ | 0.5-1 min | 25-35个循环 |
退火 | 50-68℃ | 0.5-1 min |
延伸 | 72℃ | 1 min |
终延伸 | 72℃ | 10 min | |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品中所包含的SuperStar DNA Polymerase的延伸速率为1 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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温馨提示:不可用于临床ZL。