一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)促销在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)促销
英文名：SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit(High ROX)
规格：100次
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
编号：WE0139
  本试剂盒是一步法Real-Time RT-qPCR专用试剂盒。所含的SYBR Green I荧光染料可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。全新GX逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该酶逆转录效率高，可对少量 RNA模板进行良好的逆转录反应。与RNA亲合性高，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。全新GX热启动酶，在常温下酶的活性被封闭，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥ZD功效，提GX率。本产品灵敏度高，特异性高，线性范围广，对目的基因定量更准确。

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。

不需要ROX校正的仪器:(WE0137)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0138)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0139)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0137-100次	WE0138-100次	WE0139-100次
2×SuperSYBR One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
SuperSYBR One Step EnzymeMix	50μl	50μl	50μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中的各试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、SuperSYBR One Step RT-qPCR Buffer中含有SYBR Green I 荧光染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4、本试剂盒中的各试剂应避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
5、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
6、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

操作步骤：
1、将RNA模板、引物、2×SuperSYBR One Step Buffer、SuperSYBR One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
SuperSYBR One Step EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(optional)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-0.5μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为两步法)，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为例。
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	5 min
变性	95℃	10 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为参照设定。

RT-qPCR反应条件(荧光定量PCR为三步法)：
 

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	10min
PCR预变性	95℃	5min
变性	95℃	15s	30-40 个循环
退火	56℃-64℃	30s
延伸	72℃	30s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1min
	95℃	15s
	60℃	15s

注意：
1)三步法PCR扩增时，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
2)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

我公司的一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·游离DNA提取试剂盒
编号：WE0183
英文名称：CWhipro Circulating Nucleic Acid Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、淋巴液、尿液等无细胞体液中提取游离DNA。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，样品裂解后，游离DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时游离DNA从硅胶膜上洗脱下来。本品可以处理0.1-1ml的液体样本，配置的GX微量吸附柱洗脱体积可低至20μl。纯化的DNA产量高、质量好，ZD限度去除蛋白、色素、脂类及其他YZ性杂质污染，游离DNA得率与样品的类型，储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer CL	45ml
Buffer CB(浓缩液)	60ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer EBL	10ml
蛋白酶K	100mg
蛋白酶K 储存液	5ml
吸附柱DF及收集管	50套
离心管(L-1.5ml)	50个

保存条件：吸附柱DF置于2～8℃保存1年，其他组分室温(15～30℃)。

自备试剂：无水乙醇、异丙醇。

产品特点：
1、适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、淋巴液、尿液等无细胞体液中提取游离DNA。
2、可以处理0.1-1ml的液体样本，配置的GX微量吸附柱洗脱体积可低至20μl。
3、纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入5ml的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取量下降。
3、本试剂盒可以提取0.1-1ml液体样品。
4、使用前请检查Buffer CL、Buffer CB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer CL、Buffer CB于56℃水浴孵育重新溶解。
5、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer CB中加入异丙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
6、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
7、实验开始前请将水浴锅预热至60℃。
8、可将洗脱缓冲液Buffer EBL预热至60℃后使用。

操作步骤：
1、向离心管(自备)中加入20μl 蛋白酶K 。
2、加入200μl血清/血浆样本。
注意：当样品量超过200μl时，请等比例增加蛋白酶K 、Buffer CL和Buffer CB试剂用量，具体试剂加入量可参考附表。
3、加入160μl Buffer CL，颠倒混匀，剧烈震荡至少30秒。
4、60℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：200μl 血清/血浆样本60℃孵育10-15分钟即可。
5、加入360μl Buffer CB(使用前检查是否加入异丙醇)，震荡至彻底混匀。
6、冰浴5分钟，短暂离心，使管壁和壁盖上的液体集中到管底。
7、将步骤6所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入750μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入750μl 无水乙醇，12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
11、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应。
12、将吸附柱置于新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl Buffer EBL或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)将洗脱缓冲液Buffer EBL预热至60℃后使用,且离心之前室温孵育5分钟，可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度，可以将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer EBL洗脱并于-20℃保存。

附表：不同样本量推荐试剂加入量：

加入物	加入量(μl)
样本	200	300	600	800	1000
Buffer CL	160	240	480	640	800
Buffer CB	360	540	1080	1440	1800
蛋白酶K	20	30	60	80	10

储存条件：室温(15～30℃)。


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·免疫组化试剂盒(兔源一抗)
编号：WE0314
英文名称：Rabbit HRP Kit(DAB)
规格：3ml
  本试剂盒根据生物素与链霉亲和素具有很强亲和力的原理设计。在兔源的一抗与相应靶抗原结合后，本试剂盒中的生物素化羊抗兔二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记了过氧化物酶的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。HRP可以催化底物显色，从而推断待检抗原的存在及分布。该试剂盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用优化的标记和纯化技术，使得其染色有更高灵敏度和更低的背景，适合于检测固定石蜡包埋组织切片，以及冰冻切片、细胞爬片、新鲜制备的血涂片等。兔Streptavidin-HRP试剂盒适合与百奥莱博即用型或浓缩型抗体配套使用。

试剂盒组成：

组份	3ml
Solution A(Endogenous Peroxydase Enzymes Blocking Buffer，White Solution)	3ml
Solution B(Normal Goat Serum For Blocking，White Solution)	3ml
Solution C(Goat anti-Rabbit IgG，Biotin，Ready to Use，Yellow Solution)	3ml
Solution D(Streptavidin-HRP，Ready to Use，Red Solution)	3ml
DAB-A(20×)	250μl
DAB-B(1×)	5ml

注意事项：
1、本试剂盒仅适用于一抗为兔源抗体的IHC实验。
2、以每张切片加入1滴(约50μl)计算，3ml可做60张切片，18ml可做360张切片。
3、对于内源性生物素含量比较丰富的组织，使用本试剂盒时用内源性生物素阻断剂进行封闭。
4、DAB工作液现配现用，配制好的工作液2～8℃避光1小时内有效。
5、实验过程中避免组织片干燥，因此各步孵育时工作液用量必需充足，保证完全覆盖组织样本，且尽量在湿盒中进行孵育。
6、为获得ZJ实验结果，请务必优化实验条件及试剂用量。
7、DAB为可疑致癌物，使用时请采取必要的防护措施。
8、本产品仅用于科研，不能用于人体反应或人体ZL。

操作步骤：

1、常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。

1)组织切片或细胞爬片染色前处理：
a. 石蜡切片
脱蜡水化：60ºC烤片1小时，二甲*脱蜡二次，每次5分钟；再依次浸入梯度乙醇(无水乙醇－无水乙醇－95%－85%－75%乙醇)和蒸馏水中各5分钟水化。
b. 冰冻切片和细胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01 M pH7.4 PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%Triton X-100覆盖组织(或细胞)浸润15分钟，0.01 M pH7.4 PBS洗涤2次×5分钟。
2)石蜡切片的抗原修复：绝大大多数情况下，石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。
修复工作液配制：1 L去离子水中加入10ml柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液, 100×)(WE0318)，混匀即可。
修复过程：修复液加入高压锅内，待修复切片浸于修复液中(必需没过组织)，盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1~2分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水淋洗后，再用PBS(0.01 M pH7.4)漂洗2次，每次3分钟。

2、滴加适量Solution A白色溶液，即内源性过氧化物酶封闭液室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
3、滴加适量Solution B白色溶液，即封闭用正常羊血清工作液，室温孵育10分钟，甩干。
4、滴加适量一抗工作液(商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体)，按实验要求孵育，然后PBS充分淋洗。
5、滴加适量Solution C黄色溶液，即生物素标记羊抗兔二抗工作液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
6、滴加适量Solution D红色溶液，即HRP标记的链霉亲和素，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
7、DAB显色工作液配制：根据需要量，将DAB-A和DAB-B以1：19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每毫升试剂B中滴加1滴(约50μl)试剂A，混匀即可。
8、显色：加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色，显色时间一般为1-5分钟。显微镜下观察控制显色时间，当达到ZJ显色效果后，自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保存。

储存条件：2～8℃


一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料)促销关键词：一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒,一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒(高含量ROX校正染料),SuperSYBR One Step RT-qPCR Kit(High ROX),WE0139


·PVDF膜(0.22μM)
编号：WE0300
英文名称：PVDF Membrane(0.22μM)
规格：1 sheet

·Western抗体稀释液
编号：WE0295
英文名称：Western Antibody Dilution Buffer
规格：100ml
  在蛋白印迹(Western Blot , WB)实验中，一抗和二抗通常需要适当稀释使用。本公司生产的WB抗体稀释液可用于蛋白印迹时抗体的稀释和配制，稀释和配制的一抗或二抗可以在4℃保存和使用不少于1周，可以反复2-3次用于蛋白印迹，节约您宝贵的抗体。本产品仅用于WB实验中的抗体和标记物的稀释。

注意事项：
1、本产品属蛋白制剂，室温放置过久易导致蛋白的降解和活性丧失。
2、为了能使抗体可以反复多次使用，建议尽量在2～8℃进行一抗和蛋白膜的结合反应，以减缓一抗的衰减速度。
3、本产品含防腐剂，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：

1．临用取出本产品，颠倒数次以混匀，取适量用于抗体稀释。一抗和二抗的稀释比例请参照厂家使用说明。
2．一次实验结束后，可以回收抗体稀释液，2～8℃保存，一周内可用于下次的WB。

储存条件：2～8℃

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