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北京百奥莱博专业生产供应生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)厂家价格,我公司销售全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)厂家价格
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
编号:YT031
英文名:Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)
规格:10次
本试剂盒是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。
在Klenow酶(Klenow fragment,3"-5"exo-)催化下,通过随机引物标记反应(random prime labeling)可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中,这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中,一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下,通过随机引物标记反应,ZH可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针,可多达1-15倍左右。
本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记,包括DNA*(代"片")段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA*(代"片")段应不小于100bp,小于100bp的DNA模板可以使用百奥莱博的生物素3"末端DNA标记试剂盒(YT030)进行DNA探针标记。
用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng,推荐的模板用量为100ng-1μg。本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA,可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。生物素标记DNA可以使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当试剂盒进行检测。本试剂盒可以用于10个标记反应。
试剂盒组分:
Random Primer in Buffer(5X) | 105μl |
Klenow Fragment | 11μl |
Biotin-Labeling Mix | 50μl |
Ultrapure Water | 1ml |
Biotin-Control DNA(3ng/μl) | 50μl |
探针标记终止液 | 100μl |
储存条件:-20℃。
使用说明:
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板,再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water,至总体积为34μl。(通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应)
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X),混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟,或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃,99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment,混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量,因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液,混匀,终止标记反应。至此标记反应已经全部完成,标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
10. 整个探针标记反应的流程参见下表:
100ng-1μgDNA模板 | xμl |
Ultrapure Water | (34-x)μl |
Random Primer in Buffer (5X) | 10μl |
100℃ 5分钟,立即冰浴冷却 |
Biotin-Labeling Mix | 5μl |
Klenow Fragment | 1μl |
总体积 | 50μl |
37℃孵育过夜 |
探针标记终止液 | 3μl |
-20℃保存 |
此时可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测 |
11. 探针标记效率的检测:可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后,使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表:
模板DNA量 | 生物素标记DNA产量 |
— | 孵育1小时 | 孵育20小时 |
10ng | 80ng | 900ng |
30ng | 150ng | 1350ng |
100ng | 350ng | 1650ng |
300ng | 750ng | 2200ng |
1000ng | 1300ng | 2600ng |
3000ng | 1600ng | 2600ng |
注意:具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关,上表的数值仅供参考。
12. 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb,则生物素标记DNA产物的长度通常为100-1000bp,平均长度约为300bp左右。
![](http://item.yiqi.com/pic/ConPic/4/%E8%AF%95%E5%89%82%E7%9B%92%20(43).jpg)
除
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·小鼠抗T7-tag抗体
编号:YT762
英文名称:T7-tag Mouse Monoclonal Antibody
规格:50μl
本品为来源于兔的抗T7-tag的多克隆抗体。
宿主:小鼠
克隆性:单克隆抗体
用途:WB,ELISA,IP,ICC, IF
推荐稀释比例: WB(1:1000)
About this Antibody |
Name | T7-tag Mouse Monoclonal Antibody |
Category | Monoclonal antibody(mAb); Primary antibody |
Isotype | IgG1 |
Purification | ProA affinity purified |
About the Immunogen |
Immunogen | This antibody is produced by immunizing mice with a synthetic peptide MASMTGGQQMG (KLH-coupled). |
Category | Related Products |
Background | The T7 tag is an epitope tag composed of an 11-residue peptide encoded from the leader sequence of the T7 bacteriophage gene10. This gene encodes a T7 major capsid protein whose function is not clear. The T7 tag has been used extensively as a general epitope tag in many expression vectors including the pET system that is based on T7 RNA polymerase expression systems. This antibody recognizes the T7-tag fused to either the amino- or carboxy-terminus of targeted proteins. |
注意事项:
1. 如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验,请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,请4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10,000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
3. 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得ZJ的检测效果,请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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![](http://item.yiqi.com/pic/ConPic/4/%E8%AF%95%E5%89%82%E7%9B%92%20(51).jpg)
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温馨提示:不可用于临床ZL。