CRISPR/Cas9 敲除技术 CRISPR/Cas9敲除技术的原理是Cas9结合到sgRNA上,sgRNA的引导序列与基因组DNA中的靶标序列结合,Cas9切割靶标序列产生双链断裂,迫使细胞进行紧急修复,通常条件下,细胞偏向于使用非同源末端连接(NHEJ:nonhomologous DNA end joining)的方式对断裂的双链进行修复,从而造成靶位点基因的插入或缺失突变,发生移码突变可以完全敲除目标蛋白。
CRISPR/Cas9基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破,具有操作简便,周期短,敲除效率高,作用靶点多,无基因、细胞及物种限制,目的基因的大小不受限制,不受转录本数量影响等优势,逐渐成为基因敲除的标准操作工具。CRISPR/Cas9 敲除对照质粒的结构 CRISPR/Cas9敲除对照质粒以pXC9-puro慢病毒载体为骨架。pXC9-puro可用于构建稳定细胞株,为单质粒系统(能同时表达sgRNA和Cas9),具有Puro抗性基因。
CRISPR/Cas9敲除对照质粒结构图
CRISPR/Cas9敲除对照质粒的sgRNA引导序列 CRISPR/Cas9敲除对照质粒的sgRNA引导序列如下,在人(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)、大鼠(Rattus norvegicus)等的基因组中没有靶点。
pXC9-puro-C0001 | 5´-ACGGAGGCTAAGCGTCGCAA-3´ |
pXC9-puro-C0002 | 5´-CGCTTCCGCGGCCCGTTCAA-3´ |
pXC9-puro-C0003 | 5´-ATCGTTTCCGCTTAACGGCG-3´ |
pXC9-puro-C0004 | 5´-GTAGGCGCGCCGCTCTCTAC-3´ |
提供结果1、CRISPR/Cas9敲除对照质粒:20μg,浓度500ng/μL以上,超螺旋率95%以上。
2、CRISPR/Cas9敲除对照质粒的测序图谱、酶切鉴定结果和序列。
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