CRISPR/Cas9敲除技术 CRISPR/Cas9敲除技术的原理是Cas9结合到sgRNA上,sgRNA的引导序列与基因组DNA中的靶标序列结合,Cas9切割靶标序列产生双链断裂,迫使细胞进行紧急修复,通常条件下,细胞偏向于使用非同源末端连接(NHEJ:nonhomologous DNA end joining)的方式对断裂的双链进行修复,从而造成靶位点基因的插入或缺失突变,发生移码突变可以完全敲除目标蛋白。
CRISPR/Cas9基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破,具有操作简便,周期短,敲除效率高,作用靶点多,无基因、细胞及物种限制,目的基因的大小不受限制,不受转录本数量影响等优势,逐渐成为基因敲除的标准操作工具。
CRISPR/Cas9敲除细胞株(多克隆)的服务流程 1、针对敲除目的基因设计合适的靶点,构建3个CRISPR/Cas9敲除质粒并测序验证。
2、分别将3个CRISPR/Cas9敲除质粒转染293T细胞,利用T7EⅠ试验筛选出编辑效率ZG的CRISPR/Cas9敲除质粒。
3、用编辑效率ZG的CRISPR/Cas9敲除质粒包装慢病毒,并且检测慢病毒的滴度。
4、用慢病毒感染目的细胞,抗性筛选获得CRISPR/Cas9敲除多克隆细胞。
5、利用T7EⅠ试验检测CRISPR/Cas9敲除多克隆细胞的编辑率。
客户提供信息 1、待敲除目的基因的名称和编号(gene ID)。
2、需构建敲除株的细胞信息。
实验结果交付 1. CRISPR/Cas9敲除多克隆细胞。
2. CRISPR/Cas9敲除质粒。
3. CRISPR/Cas9敲除质粒的序列,酶切鉴定、测序结果。
4. T7EⅠ试验检测结果。
5. 说明实验过程中所用的耗材、仪器设备和操作过程的实验报告一份。
服务周期:2-3个月。
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