CRISPR/Cas9敲除质粒套餐(3靶点/基因+测序报告)
CRISPR/Cas9敲除质粒用于敲除目的蛋白、miRNA。
CRISPR/Cas9敲除技术
CRISPR/Cas9敲除技术的原理是Cas9结合到sgRNA上,sgRNA的引导序列与基因组DNA中的靶标序列结合,Cas9切割靶标序列产生双链断裂,迫使细胞进行紧急修复,通常条件下,细胞偏向于使用非同源末端连接(NHEJ:nonhomologous DNA end joining)的方式对断裂的双链进行修复,从而造成靶位点基因的插入或缺失突变,发生移码突变可以完全敲除目标蛋白。
CRISPR/Cas9基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破,具有操作简便,周期短,敲除效率高,作用靶点多,无基因、细胞及物种限制,目的基因的大小不受限制,不受转录本数量影响等优势,逐渐成为基因敲除的标准操作工具。
CRISPR/Cas9敲除载体
pXC9-puro:慢病毒载体,可用于构建稳定细胞株,单质粒系统(能同时表达sgRNA和Cas9),具有Puro抗性基因。
pX330-puro:单质粒系统(能同时表达sgRNA和Cas9),具有Puro抗性基因。
pX330-copGFP:单质粒系统(能同时表达sgRNA和Cas9),具有copGFP荧光标记基因。
CRISPR/Cas9敲除质粒构建流程
提供结果
1. CRISPR/Cas9敲除质粒:20μg,浓度500ng/μL以上,超螺旋率95%以上。
2. 500μL菌液。
3. CRISPR/Cas9敲除质粒的测序图谱、酶切鉴定结果和序列。
4. CRISPR/Cas9敲除质粒构建报告。
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