CRISPRi的原理 催化失活的Cas9(dCas9)连上转录YZ子,可以有效YZ基因组特定位点的转录,这一工具被称为CRISPRi。CRISPRi特别适合分析非编码RNA的具体功能。 CRISPRi载体介绍 pLVU9i-Puro第三代慢病毒载体,能够表达sgRNA和dCas9-KRAB,具有Puro抗性基因。KRAB是强转录YZ域。 pLVU9i-GFP是第三代慢病毒载体,能够表达sgRNA和dCas9-KRAB,具有EGFP荧光标记基因。KRAB是强转录YZ域。
CRISPRi质粒构建流程
CRISPRi质粒构建服务说明1、客户提供基因名称和基因编号。
2、HYY提供:
(1)3×20μg CRISPRi质粒,浓度500ng/μL以上,超螺旋率95%以上;
(2)3×500μL CRISPRi质粒的菌液;
(3)CRISPRi质粒的测序图谱、酶切鉴定结果和序列;
(4)CRISPRi质粒构建报告。
3、实验周期2~3周。
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