Taq DNA polymerase
英文全称: Taq DNA Polymerase
产品内容
产品名称 | 产品编号 | 分子量 | 产品纯度 | 酶活 | 储存条件 | 包装 |
Taq 酶 | BBR0001 | 94 kDa | > 95% | 5 U/µl | -20℃ | 200U |
产品概述
Taq DNA Polymerase简称Taq酶,是一种来源于嗜热菌Thermus aquaticus的高度热稳定的DNA聚合酶,95℃孵育时的半衰期大于40分钟,是最常用的DNA聚合酶之一。Taq DNA Polymerase 具有5′-3′DNA 聚合酶活性和5′-3′外切核酸酶活性,无3′-5′外切酶活性。在PCR反应中,Taq DNA Polymerase延伸速度为1-2 kb/分钟,产物3′末端附有一个“A”碱基,可直接用于T/A载体克隆。本Taq酶可以扩增长度达5 kb的DNA片断,最长可以扩增长达8kb的DNA片断。通常适合扩增3kb以下的DNA片断。该酶通过大肠杆菌表达纯化获得,和纯化获得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性质相同。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸摄入为酸不溶物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
产品溶液组分
酶储存溶液: 20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM E, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P-40, 0.5% (v/v) Tween-20 and 50% (v/v) glycerol。
10×PCR Buffer (with Mg2+): 100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃ ), 500 mM KCl, 15mM MgCl2。
推荐PCR反应体系
试剂 | ZZ浓度 | 体积 |
ddH2O | - | (36.75-x)µl |
10×PCR Buffer (with Mg2+) | 1× | 5µl |
dNTP (2.5mM each) | 0.2mM each | 4µl |
模板DNA | 10pg-1µg* | xµl |
引物混合物(10µM each) | 0.8µM | 4µl |
Taq DNA Polymerase (5U/µl) | 1.25U/50µl | 0.25µl |
总体积 | - | 50µl |
*对于不同类型的模板在50µl反应体积中推荐用量如下:
哺乳动物基因组DNA:0.1-1µg;大肠杆菌基因组DNA:10-100ng;质粒DNA:0.1-10ng。
PCR反应循环的设置
STEP1(起始变性): 94℃ 3min
STEP2(变性): 94℃ 30sec
STEP3(退火): 55℃ 30sec
STEP4(延伸): 72℃ 1kb/min
STEP5(循环): Go To STEP2 for 30 cycles
STEP6(ZZ延伸): 72℃ 10min
STEP6(临时保存): 4℃ forever
保存条件: -20 ℃保存。