Pfu DNA polymerase
英文全称: Pfu DNA Polymerase
产品内容
产品名称 | 产品编号 | 产品纯度 | 酶活 | 储存条件 | 包装 |
Pfu酶 | BBR0005 | > 95% | 5 U/µl | -20℃ | 500U |
产品概述
Pfu DNA Polymerase简称Pfu酶,是最常用的高保真DNA聚合酶之一。该酶是一种来源于嗜热菌Pyrococcus furiosus的高度热稳定的DNA聚合酶,分子量为90 kDa。Pfu酶可以催化5’ 至3’ 方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同,Pfu具有3′-5′的外切酶活性,它能纠正DNA扩增过程中产生的错误,而传统的Taq DNA Polymerase却不能,Pfu是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率ZD的聚合酶,热稳定性更好,95℃反应1小时仍保持90%以上活性。本Pfu DNA Polymerase为recombinant Pfu DNA Polymerase,通过大肠杆菌表达纯化获得,和纯化获得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性质相同。·
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸摄入为酸不溶物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。·
产品溶液组分
酶储存溶液: 20 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P-40, 0.1% (v/v) Tween-20 and 50% (v/v) glycerol。
10×Pfu Buffer (with Mg2+): 200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃ ), 100 mM KCl, 100mM (NH4)2SO4, 100 mM KCl, 1% (v/v) Triton X-100, 1mg/ml BSA。
推荐PCR反应体系
反应物组成 | ZZ浓度 | 体积 |
10×Pfu Buffer (with Mg2+) | 1× | 5µl |
dNTP (2.5 mM each) | 0.2mM each | 4µl |
引物混合物(10µM each) | 0.8µM | 4µl |
模板DNA | 质粒5-20ng, 基因组100ng | xµl |
Pfu DNA Polymerase (5U/µl) | 2.5U/50µl | 0.5µl |
ddH2O | - | 至50 µl |
PCR反应循环的设置
STEP1(起始变性): 94℃ 3min
STEP2(变性): 94℃ 30sec
STEP3(退火): 55℃ 30sec
STEP4(延伸): 72℃ 0.5kb/min
STEP5(循环): Go To STEP2 for 30 cycles
STEP6(ZZ延伸): 72℃ 10min
STEP6(临时保存): 4℃ forever
保存条件: -20 ℃保存。