Tris缓冲盐溶液(20×TBS,pH8.0)500ml免费代测注意事项
(1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
(4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作,以免影响细胞状态。
(5)在细胞洗涤的zui后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
(6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
(7)PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首先进行Annexin V-FITC染色,zui短可在上机前5分钟再加入PI染色。
Tris缓冲盐溶液(20×TBS,pH8.0)500ml免费代测实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50~100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
把试剂盒中提供的CCCP(10mM )推荐按照1 ∶1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
(1)取 10~60 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 ℃孵育20 分钟。
(3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育结束后,600g 4 ℃离心3 ~4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
(5)用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞,600g 4 ℃离心 3~4 分钟,沉淀细胞,弃上清。
(6)再用适量 JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
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CCL21 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白
人小肠平滑肌细胞完全培养基 100mL
MSLN Others Human 人 MSLN / Mesothelin (aa 296-580) 人细胞裂解液 (阳性对照)
HFTF细胞,人胚胎眼Tenon's囊成纤维细胞 迟缓真杆菌/迟缓埃格特菌 小耳猪肺细胞;SEP-L2
小鼠胚胎成纤维细胞;MEF
P19(小鼠畸胎瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 野猪 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人细胞裂解液 (阳性对照)
雪旺氏细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
EFNB2A Others Danio rerio (zebrafish) 斑马鱼 EFNB2A / Ephrin B2a 人细胞裂解液 (阳性对照)
正常大鼠肾细胞;NRK
WI-38细胞, 人胚肺细胞 小鼠肺成纤维细胞,L929细胞 CL-00025637(人膀胱癌细胞)5×106cells/瓶×2
SMMC-7721(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2
HDMEC-c 人微血管内皮细胞(HDMEC)来自少年者 500,000cells 肺微血管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
CSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人细胞裂解液 (阳性对照)
人少突胶质细胞
人前脂肪细胞-内脏RNAHPA-v miRNA5 μg
兔主动脉平滑肌细胞;SMC 白血病细胞,L1210细胞 SH2细胞,小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞
人胚肺细胞VA13细胞;WI-38 VA13亚系2RA
HA Others H16N3 甲型流感 H16N3 (A/black-headed gull/Sweden/5/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人髓系细胞触发受体-1(TREM-1)免疫试剂盒 Human TREM-1 ELISA Kit
乙酰辅酶A(Acetyl-CoA)试剂盒 紫外分光 25管/24样
RatTri-iodothyronine,T3ELISA试剂盒大鼠三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Humanlipoproteinα,Lp-αELISA试剂盒人脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒规格:96T/48T
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兔补体蛋白3(C3)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human islet amyloid polypeptide (IAPP) ELISA Kit 人胰岛淀粉样多肽(IAPP)ELISA试剂盒
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