特别提示:包括血浆/血清miRNA提取分离试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:血浆/血清miRNA提取分离试剂盒
英文名称:miRNA Isolation Kit from Serum/Plasma
产品货号:WH0128
产品规格:50次
本试剂盒是专门针对血清、血浆样本miRNA提取而开发的新一代产品。该试剂盒中的裂解液MZA经过长时间研发改良,具有一般裂解液不具有的裂解能力和提取灵敏度,试剂盒中的吸附柱采用特殊的硅基质膜填料,大大增强了其对RNA、尤其是small RNA(<200nt)的吸附能力,提取得到的miRNA纯度更好、质量更高,提取产物可用于RT-qPCR、Northern Blot、DotBlot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等常规实验。
产品特点:
·针对性强:专为提取血清/血浆中的miRNA设计,裂解液进行特别优化。
·GX:1h内即可获得高质量的miRNA,提取得率高。
·超纯:柱法纯化,产物无gDNA和盐离子污染。
试剂盒组成:
组分 | 规格 | 裂解液MZA | 50ml | 漂洗液RW | 12 ml | 去蛋白液MRD | 24 ml | RNase-Free ddH2O | 15 ml | RNase-Free吸附柱miRelute及2ml收集管 | 50套 | RNase-Free离心管(1.5 ml) | 50个 |
储存条件:室温(15-25℃),裂解液应在2-8℃避光保存
预防RNase污染,应注意以下几方面:
1.经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。
2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3.RNA在裂解液中不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4.配制溶液应使用无RNase的水(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1% (v/v),放置过夜,高压灭菌)。
操作步骤:
次使用前应在漂洗液RW和去蛋白液MRD中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。
1.样品处理:每200μl血清或血浆中加入900 μl裂解液MZA,振荡器振荡混匀30 sec至完全匀浆,颠倒混匀。如需使用检测外参(CR100-01),请于完全匀浆之后、颠倒混匀之前加入(1μM浓度,加入1 μl)。
注意:提取样本量建议不要大于200μl,否则会导致RNA产率以及纯度偏低。裂解液的量严格按照说明书加入,如果加入量少会使界相分离不彻底,zuì终也会导致低的产率与纯度。
2.室温放置5 min,使得核酸蛋白复合物完全分离。
3.加入200μllǜ仿,盖好管盖,剧烈振荡15 sec,室温放置5 min。
4.12000rpm (~13400×g),4℃,离心15 min,样品会分成三层:黄色的有机相,白色的中间层和无色的水相,RNA主要在水相中,把水相转移到新管中,进行下一步操作。
5.量取转移液的体积,缓慢加入转移液2倍体积的无水乙醇(如:500 μl的转移液加1 ml无水乙醇),混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱miRelute,室温放置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,离心后弃掉流出液,保留吸附柱miRelute。
6.向吸附柱miRelute中加入700 μl去蛋白液MRD (请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,弃废液。
7.向吸附柱miRelute中加入500 μl漂洗液RW (请先检查是否已加入乙醇),室温静置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心30 sec,弃废液。
8.重复步骤7一次。
9.室温12000rpm (~13400×g)离心2 min,弃收集管。
注意:此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,离心后将吸附柱miRelute在室温放置片刻,或置于超净工作台上通风片刻,以充分晾干。如果有漂洗液残留,可能会影响后续的RT等实验操作。
10.将吸附柱miRelute转入一个新的RNase-Free 1.5 ml离心管中,向吸附膜ZX位置加15-30 μl RNase-Free ddH2O,室温放置2 min,室温12000rpm (~13400×g)离心2 min。注意:洗脱缓冲液体积不应少于15 μl,体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃,以防降解。如果想提高RNA得率,可重复步骤10一次。
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