BTN100811 质谱兼容型蛋白银染试剂盒

特别提示：包括质谱兼容型蛋白银染试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：质谱兼容型蛋白银染试剂盒

英文名称：MS-Compatible Silver Stain for Protein

产品货号：BTN100811

产品规格：10次



银染是目前检测PAGE电泳分离后的蛋白质的zuì灵敏的方法，MS(质谱)是确定未知蛋白zuì常用和zuì快捷的方法，但将银染得到的蛋白直接用于MS分析有很多问题，其中zuì主要问题是常规银染所使用的试剂(包括强氧化剂和醛类)容易使蛋白质发生化学修饰，这样MS分析得到的氨基酸信息跟蛋白质实际的氨基酸信息并不相同。为了使银染得到的蛋白质可以用于MS分析，为此本公司开发MS 兼容型银染试剂盒。



产品特点：

1．跟MS 兼容，原理是避免使用能化学修饰蛋白质的试剂，所得蛋白质没有发生化学修饰，故可直接用于后续的MS(包括MALDI-TOF-MS和ESI-MS)分析。

2．银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍左右，可达0.2-0.6ng蛋白质/条带。

3．可用于各种PAGE胶，包括变性PAGE胶(如SDS-PAGE，尿素-PAGE)，非变性PAGE胶，IEF胶(等电电泳胶)，2D胶等。

4．四种溶液都是现用现配，实验结果的可重复性好。



产品组成：

成分	规格
溶液A组分一干粉	1份
溶液A组分一溶剂	100ml
溶液A组分二干粉	10份
溶液B干粉	5g
溶液C组分一干粉	10份
溶液C组分二	2ml
溶液D干粉	10份
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。



准备工作：

所有溶液均需现配现用。以下按一块PAGE胶需要200mL溶液配制，用户可以根据自己PAGE胶的大小增减溶液的用量。

一、用自备试剂配制400mL固定液(按一次银染需要固定2次计算，每次固定需200mL固定液)

将160mL甲醇、40mL乙酸和200mL去离子水充分混合后即得400mL固定液。

二、配制200mL溶液A

先配制溶液A组分一储备液：将溶液A组分一干粉加入到100mL溶液A组分一溶剂中，充分摇晃溶解即得溶液A组分一储备液。此溶液可以4℃保存。将60mL甲醇、8mL溶液A组分一储备液、1 份溶液A组分二(干粉)和132mL 去离子水充分混合后即得200mL溶液A。

三、配制200mL溶液B

称0.5g溶液B干粉，溶于200mL 去离子水中，充分混合后即得200mL溶液B。

四、配制200mL溶液C

将1 份溶液C(干粉)溶解在200mL 去离子水中(干粉不容易溶解，需搅拌)即得溶液C。注意：使用前还需要再加入160μL溶液C组分二并充分混匀。

五、配制200mL溶液D

将1 份溶液D(干粉)溶解在200mL 去离子水中即得溶液D。



银染：

1．PAGE电泳(包括非变性PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE等)结束后，将PAGE胶转移到装有200mL 固定液的瓷盘或玻璃盘中，摇晃30分钟以去除干扰银染的组分(如甘氨酸、SDS、尿素、DTT、甘油等)，倒掉固定液。注：此步很重要，否则银染背景很高。

2．重复上步一次。

3．将PAGE胶转移到200mL溶液A中，室温摇晃30分钟。

4．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。

5．将PAGE胶转移到200mL的溶液B中，室温摇晃20分钟。

6．用200mL 去离子水漂洗2次，每次1分钟(不要延长或缩短)。

7．将PAGE胶转移到200mL的溶液C中，室温摇晃直到蛋白电泳条带显现(一般需要10分钟左右)。

8．将PAGE胶转移到200mL的溶液D中，室温摇晃终止反应。

9．用200mL 去离子水漂洗3次，每次5分钟(不要延长或缩短)。

10．切下条带或胶块进行后续的脱银，原位trypsin酶解，多肽沉淀和MS分析(略)。



技术资料：

MS前处理步骤(仅供参考)

1．脱银：将切下的银染斑点或条带用脱银液(30mM K3Fe(CN)3和100mM Na2S2O3的1：1的混合液)处理直到黑色消失。

2．还原：将胶块或胶条置于10mM DTT(溶剂为50mM NH4HCO3)，56℃处理一小时。

3．烷化：将胶块或胶条置于55mM 碘乙酰胺(溶剂为50mM NH4HCO3)，室温避光处理45分钟。

4．原位trypsin酶解：将胶块或胶条置于10 ng/uL 测序级别的trypsin溶液中(溶剂为25mM NH4HCO3)，37℃处理过夜。

5．多肽提取：用5%三氟乙酸抽提酶解液，再用2.5%三氟乙酸-50%ACN 混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀(多肽)zuì后溶于0.5%三氟乙酸中。

6．MS分析：参考相关MS仪器使用手册。



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名称：考马斯亮蓝染色液(常规法)

货号：YT057

规格：250ml

本品是以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的常规染色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。本染色液可以和百奥莱博的考马斯亮蓝染色脱色液(YT058)配套使用。使用本染色液进行染色，采用常规染色方法需至少1小时可以完成染色；采用快速染色方法数分钟即可完成染色。本染色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。



储存条件：室温，有效期一年。



名称：酵母蛋白抽提试剂盒

货号：WE0263

规格：25次|100次

  本试剂盒用于从酵母细胞中快速，GX而温和地抽提可溶性蛋白。采用试剂处理，可以避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。使用方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏。本抽提试剂可用于提取啤酒酵母、裂殖酵母、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌及革兰氏阳性菌的蛋白抽提。与传统方法相比，处理得到的提取液中可溶蛋白产量大，活性高，提取快速；提取液可以直接用于Ni-NTA、GST等亲和纯化。酵母蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶YZ剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。



试剂盒组成：

组份	25次	100次
Yeast Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温



注意事项：

1、提取液中含有去污剂，不宜使用受去污剂干扰的蛋白定量方法。

2、为了获得实验zuì佳效果，请根据实验调整zuì佳使用量。



使用方法：

1、请在蛋白抽提前取出实验所需Yeast Protein Extraction Reagent进行预冷。

2、将酵母培养液3000×g，4℃，离心5分钟，收集菌体。

3、取适量Yeast Protein Extraction Reagent，抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。

4、每50 mg酵母加入500μl 1×工作液，涡旋振荡或上下吸打使酵母充分重悬。

5、将细胞悬液置于冰上，孵育20分钟(每间隔5分钟轻微摇晃一下)。

6、～13400×g离心10分钟。

7、转移上清至新管中，进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。



储存条件：-20℃



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