HR0021 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

特别提示：包括核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

英文名称：Nucleoprotein and Cytoplasmic Protein Extraction Kit

产品货号：HR0021

产品规格：50T|100T



核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶YZ剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯合层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将zuì后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

本试剂盒按每个处理样本50mg细胞/组织计(大约50μl细胞压积)，如果需要处理大量的细胞/组织，将提取液按细胞体积的1:10加入细胞沉淀即可。每个50T试剂盒大约可以提取2.5g细胞/组织样本。



储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶YZ剂-20℃保存。

【注】

●蛋白酶YZ剂未开盖使用前也可以2-8℃保存。开盖使用后-20℃保存。

●蛋白酶YZ剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期：一年。



※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※

使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或ZL。

产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。

使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。



注意事项：

1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得zuì佳实验效果。

2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3．禁止与其他品Pai的试剂混用，否则会影响使用效果。

4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5．zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。



产品特点：

1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2．将蛋白提取的时间缩短至1小时。

3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5．蛋白提取液：含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。提取液中已含磷酸酶YZ剂混合物。

6．蛋白酶YZ剂YZ了蛋白的降解，蛋白酶YZ剂配方优化。蛋白酶YZ剂混合物包含6种独立的蛋白酶YZ剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64。每一种YZ剂可特异性YZ某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以YZ几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。



试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 涡旋混匀器、振荡器 ●冰箱，冰盒

使用注意事项：

1．旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2．实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3．蛋白酶YZ剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

4．蛋白酶YZ混合物避免反复冻融。

5．如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶YZ剂混合物不可以一次全部加入提取液。

6．可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶YZ剂单品。



使用方法：

细胞蛋白提取

1．提取液制备：

每200μl蛋白提取液A中加入1μl蛋白酶YZ剂混合物，混匀后置冰上备用。

每200μl蛋白提取液B中加入1μl蛋白酶YZ剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶YZ剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶YZ剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶YZ剂。

●蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整YZ剂混合物是否加入。

2．取5-10×106个细胞，在4℃，1000g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

【注】

● 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

3．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

【注】

●在1000g条件下离心5分钟。

4．每5-10×106中加入400μl冷的提取液A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件下振荡15-30分钟。

【注】

●用振荡器/摇床的较低转速，保持提取液轻微晃动即可。

● 没有振荡条件可以不振荡，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

● 如果部分细胞不能完全裂解，导致核蛋白纯度低，可以延长振荡时间。

5．然后在4℃，1000g条件下离心10分钟。

6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

7．沉淀用PBS洗涤一次，在4℃，1000g条件下离心5分钟，弃上清。

8．在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。

【注】

● 根据后面和蛋白浓度测定的情况，可调整使用量，一般在50-200μl。

9．置2-8℃条件振荡30分钟，至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。

【注】

●用振荡器/摇床的较低转速，保持提取也轻微晃动即可。

● 没有振荡条件可以不振荡，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

10．在4℃，14000g条件下离心10分钟。

11．将上清吸人另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

12．将上述蛋白提取物定量分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】

● 建议用BCA法进行蛋白定量。

●蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

组织蛋白提取

1．提取液制备：

每200μl蛋白提取液A中加入1μl蛋白酶YZ剂混合物，混匀后置冰上备用。

每200μl蛋白提取液B中加入1μl蛋白酶YZ剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶YZ剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶YZ剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶YZ剂。

●蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整YZ剂混合物是否加入。

2．取适量组织样本，用手术剪刀尽可能剪碎，加冷PBS，用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

3．在4℃，500g条件下离心5分钟，弃上清。

4．每20-30μl细胞压积(沉淀体积)中加入200μl冷的提取液A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件下振荡20-30分钟。

【注】

●用振荡器/摇床的较低转速，保持提取液轻微晃动即可。

● 没有振荡条件可以不振荡，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

● 如果部分细胞不能完全裂解，导致核蛋白纯度低，可以延长振荡时间。

5．然后在4℃，1000g条件下离心10分钟。

6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

7．沉淀用PBS洗涤一次，在4℃，1000g条件下离心5分钟，弃上清。

8．在沉淀中加入100μl-200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。

9．置2-8℃条件振荡30分钟，至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。

【注】

●用振荡器/摇床的较低转速，保持提取也轻微晃动即可。

● 没有振荡条件可以不振荡，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

10．在4℃，12000g条件下离心10分钟。

11．将上清吸人另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

12．将上述蛋白提取物定量分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】

● 建议用BCA法进行蛋白定量。

●蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。



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名称：高pH缓冲液套装

货号：BTN100828

规格：30次

本产品用于Native-PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离大多数蛋白质，这些蛋白在此条件下一般都向阳极移动。本产品的特点是即开即用，省去用户单独配置每种溶液的麻烦。



产品组成：

成份	规格(30次*)
4×浓缩胶配胶液(pH6.7)	100ml
4×分离胶配胶液(pH8.9)	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
5×高pH上样液	1ml
使用手册	1份

*注：1次是指的一次mini-Gel电泳



储存条件：常温运输及保存(5×高pH上样液需要-20℃保存)，有效期为一年。



名称：His标签蛋白纯化试剂盒

货号：YT046

规格：10ml

本试剂盒是一种采用了新型His-tag蛋白纯化树脂(YT616)的可以兼容还原剂和螯合剂，并能简单、快速、GX并且高特异性地纯化His标签蛋白的试剂盒。试剂盒提供了His标签蛋白所需的相关试剂和亲和层析空柱管，为His标签蛋白的纯化带来了极大的便利。



一个包装的本产品zuì多可纯化10种带有His标签重组蛋白，每种蛋白的zuì大纯化量为10-15mg。对于分子量为50kD的带有His标签重组蛋白，一个包装的本产品实际zuì多可纯化10种约3-10mg的蛋白。在不使用亲和层析空柱管的情况下，参考本说明书本试剂盒足够进行500次的小量His标签蛋白纯化。



His-tag蛋白纯化树脂————10ml

非变性裂解液————120ml

非变性洗涤液————60ml

非变性洗脱液————60ml

溶菌酶———————60mg

亲和层析空柱管(3毫升)————10套



注意事项：

1. 请勿在-20℃或更低温度冷冻保存His-tag蛋白纯化树脂。

2. His-tag蛋白纯化树脂使用过程中，缓冲试剂如Tris、HEPES、MOPS等的浓度不宜超过100mM，EDTA浓度不宜超过20mM，SDS和sarkosyl的浓度不宜超过0.3%，Triton、Tween、NP-40的浓度不宜超过2%，脱氧胆酸钠、CHAPS的浓度不宜超过1%，组氨酸浓度不宜超过20mM，钙离子浓度不宜超过5mM，钠离子和镁离子浓度可以高达2M，甘油浓度可以高达50%。其它未提及试剂的兼容性可以参考上述试剂，但还有待实验验证。

3. His-tag蛋白纯化树脂保存和纯化过程中应始终保持凝胶湿润。

4. 若离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。

5. 蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解。为有效YZ蛋白降解，可以在裂解液中添加适量的蛋白酶YZ剂混合物。

6. 若使用本说明书提供的条件无法达到理想的纯化效果，可尝试改变洗涤液和洗脱液中咪唑的浓度和(或)pH，以达到zuì优效果。



储存条件：4℃，有效期一年。



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