武汉巴菲尔生物-原核细胞载体构建与表达

原核表达载体构建  

定义：原核表达即将动、植物的目标靶基因片段连接至合适的原核表达载体中，并转化进入原核细胞，随后利用细菌自身的蛋白质表达系统进行目标蛋白质的重组表达。原核表达系统是远今为止Z为成熟可靠的蛋白表达系统，其优点是实验周期短、成本低、产量高。大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济，倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用Z广泛，Z成功的表达体系，常做GX表达的体系。

真核基因在大肠杆菌中表达，必须有合适的表达载体(Vector),常用载体：pBV220,pET系统

目的基因在大肠杆菌中表达的情况：

　　大肠杆菌更适合原核基因的表达，外源基因表达产量与单位体积产量是正相相关的，而单位体积产量与细胞浓度和每个细胞平均表达产量呈正相相关.细胞浓度与生长速率，外源基因拷贝数和表达 产物产量之间存在动态平衡，单个细胞的产量又与外源基因拷贝数，基因表达效率，表达产物的稳定性和细胞代谢负荷等因素有关。

　　例如，科学家们把人的胰岛素基因送到大肠杆菌的细胞里，让胰岛素基因和大肠杆菌的遗传物质相结合。人的胰岛素基因在大肠杆菌的细胞里指挥着大肠杆菌生产出了人的胰岛素。并随着它的繁殖，胰岛素基因也一代代的传了下去，后代的大肠杆菌也能生产胰岛素了。这种带上了人工给予的新的遗传性状的细菌，被称为基因工程菌。

一般实验流程图：