RNA干扰载体shRNA质粒构建

生博采用U6或H1启动子的shRNA表达载体，可以在细胞内直接转录出siRNA，行使其RNAi功能，GFP可以监测转染效率，抗性基因可以用于药物压力下细胞稳定株筛选，能够解决siRNA干扰时间短的缺点。同时提供用于RNA干扰实验的腺病毒载体 (Adenoviral vector)和慢病毒载体(Lentiviral vector)病毒型载体构建服务。我们根据客户提供的基因ID设计3到4个siRNA靶点并安排引物合成。把单链的引物退火成双链oligo序列，连接入双酶切线性化的RNA干扰载体，测序验证正确的shRNA干扰载体，进行高纯度质粒抽提。shRNA干扰载体后续可以进行转染实验，病毒包装实验，稳定株筛选实验等。

服务流程图

参考文献

[1] SUi G,Soohoo C,Affar el B,et al. A DNA vector-based RNAi technology to suppress gene expression in mammalian cells.Proc.Natl Acad Sci USA,2002, 99(8):5515-5520.
[2] PAddison PJ,Caudy AA,Hannon GJ. Stable suppression of gene expression by RNAi in mammalian cells[J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99(3):1443-1448.
[3] BRummelkamp TR,Bernards R,Agami R. A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells[J].Science,2002,296(5567):550-553.