普林斯顿 修饰Lysine-C（赖氨酸肽链内切酶） 测序级

Princeton Separations公司测序级肽链内切酶是高度纯化的酶，通过化学修饰，降低了酶的自裂解，增加了酶的稳定性。由于在超的长消化期间酶持续保持活性，因此可以极好地控制蛋白裂解反应。
   特性

   来自于产酶溶杆菌的Lysine-C肽链内切酶是一种苏氨酸蛋白酶，它高度特异性地裂解赖氨酸羧基端肽键。 
   化学修饰
   使用Princeton Separations开发的一种方法将高纯度酶制品进行化学修饰。这种修饰使酶呈现出自分解抗性和稳定的酶活性。该修饰酶在30°C反应缓冲液中孵育6小时，其仍能保持至少90%的酶活性，在同样条件下孵育24小时，仍保持65%的活性 ,并仍保留对赖氨酸的特异性。 
   质量控制

   我们公司对测序级Lysine-C肽链内切酶与测序应用相关的质量进行鉴定。两种方法控制质量：一种是酰胺酶法；另一种是蛋白酶（消化）法，两种方法都以酪蛋白为底物。以胰蛋白酶作为对照，同时消化酪蛋白，然后两者进行比较，计算出Lysine-C肽链内切酶与胰蛋白酶活性等价的值。使用合成肽阵列检测酶的特异性。 
   制备 
 每只小瓶装有Lysine-C内切蛋白酶干粉5µg，用20µl去离子水或反缓冲液溶解，使蛋白酶浓度为0.25µg/µl 

  应用
 将酶与蛋白以1：20或1：100比值（W/W）混合于标准的消化缓冲液如50mM 碳酸氢铵, pH 7.8 - 8.0。一般25-30°C，孵育1-10小时，在某些情况下可以延长到24小时。根据被蛋白的性质确定孵育时间。通过调整酶与样品的比率可得到孵育时间。需要指出的是Lysine-C的消化活性仅为胰蛋白酶的40%。 

  储存
溶解的酶应冷冻储存于-10 to - 20°C。 
在变性中的稳定性
 在蛋白难于溶解的情况下，则在消化之前将变性剂如尿素或盐酸胍加入到蛋白混合液中。下表中所例举的数据显示变性剂对修饰 Lysine-C活性的影响。
                                    变性剂    浓度     活性控制%
                                      对照     —       
                                      尿素    0.50M     
                                      尿素    1.00M     
                                      尿素    2.00M     
                                      盐酸胍  0.10M     
                                      盐酸胍  0.25M       80%
                                      盐酸胍  0.50M       30%
                                      盐酸胍  1.00M       10%

References
 Jackson, R. L.., and Wolfe, R. S., J. Biological Chemistry 243, 879 (1968)
 

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