凝胶迁移试验(EMSA)技术服务
电泳迁移率变动分析(electrophoresis mobility shift assay, EMSA)又称凝胶迁移实验(gel retardation assay, gel shift assay),是一种使用标记探针来研究蛋白与DNA调控区序列结合的技术,可对DNA序列特异性结合蛋白进行定性和定量,是目前检测核转录因子常用的方法。电泳迁移率变动分析检测中,当DNA结合蛋白与相应的DNA 片段或寡核苷酸结合而形成DNA-蛋白质复合物后,DNA片段的分子量及电荷发生改变,因而在非变性聚丙烯酰胺凝胶(native PAGE)电泳体系中,其电泳迁移率发生改变,通常较游离的DNA片段的泳动速率慢得多,因而,在X-光胶片上形成较游离DNA片段滞后的带型。结合滞后条带的有无、 量的多少,可反映出DNA 结合蛋白与DNA探针的结合活性、DNA 结合蛋白的表达及活化水平,并可以计算出DNA结合蛋白与DNA探针的结合常数或解离常数。用此方法可以鉴定某种DNA结合蛋白,以及这种蛋白与特异基因序列的结合能力。
EMSA凝胶迁移实验步骤:
1、探针的标记:
2、探针的纯化:
3、EMSA 胶的配制:
4、EMSA结合反应:
5、电泳分析:
上海釜诚生物科技有限公司 上海市东高路680号柠檬公寓A120室
联系电话:18317038349 刘振
QQ:2441149844
邮箱:bio_fcen@163.com
EMSA凝胶迁移客户需知:
方法:同位素P32标记探针/生物素/荧光素标记/进行检测。
技术要点:实验过程包括核蛋白的提取,同位素标记/生物素/荧光素标记/与纯化,凝胶电泳,胶片暴光等。在EMSA操作中会用到同位素,要注意实验室环境和实验员的保护。
EMSA凝胶迁移结果交付:
1、实验合成生物素标记探针
2、非标记探针(竞争法EMSA)
3、剩余目的蛋白和抗体
4、标准实验流程报告
5、原始实验图片及数据
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EMSA凝胶迁移客户提供
1、细胞核蛋白或纯化的转录因子,部分实验亦可使用重组表达的蛋白,依据实验设计每张膜至少提供50ul,浓度大于0.5mg/ml
2、探针序列,如无探针序列,请提供DNA结合蛋白相关信息或相关文献,便于设计探针
3、结合蛋白特异性抗体50ul以上,浓度大于0.5mg/ml
EMSA凝胶迁移其他说明
一 EMSA主要实验技术核蛋白抽提 探针标记 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) 免疫印迹电转移 检测获得图像相关
二 非放射性EMSA实验
1. 非放射性EMSA实验原理非放射性EMSA实验原理基于化学发光检测系统与EMSA相结合,利用生物素标记的探针与HRP标记的亲和素之间的结合,通过增强化的化学发光底物可以发出荧光的方法,可用仪器检测出DNA-蛋白质互作产生的电泳迁移率的变化。
2. Viagene 非放射性EMSA简介 Viagene EMSA成套试剂是结合高灵敏度的化学致发光技术建立起来的实验系统。特异性检测活化的NF-KB,STAT3,STAT5等。
非放射性EMSA特点
针对性强:针对活化的NFKB,STAT3, STAT5等。
成功率:实验条件成熟,成功率高,无需再摸索实验条件。
即用性:实验用品已经配备好,拿来即用。 操作简单, 价格便宜:性价比高
本公司只提供非放射性EMSA技术服务!
EMSA的典型分析结果可以参见下图说明
1,阴性对照反应(标记探针);
2, 常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针);
3, 探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记探针);
4, 突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的 核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记突变探针);
5, Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+目的转录因子的特异抗体)。
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