技术优势
- 技术稳定,建库重复性好:同一样本重复建库相关性Pearson值大于0.993;
- 基于高通量测序技术,可一次性获得样本中几乎全部的lncRNA信息;
- 不局限于对已知lncRNA的研究,还可进行novel lncRNA的预测;
- 除人和鼠外,还可应用于其他真核物种,可共同制定定制化研究方案。
技术参数
一、样品要求
表1 样品质量判定标准
样品类型 | 检测方法 | 检测结果 | 判定结论 |
Agilent/AGE | NanoDropTM |
人、鼠Total RNA | Agilent 2100 | m≥10 μg | c≥200 ng/μL RIN≥7.0 28S/18S≥1.0 | 图谱基线无上抬, 5S峰正常 | N/A | Level A |
5 μg≤m≤10 μg | Level B |
说明:
Level A:A类样品,指的是质量满足建库测序要求,且总量可以满足2次或者2次以上建库需要的样品。
Level B:B类样品,指的是质量满足建库测序要求,且总量可以满足1次但不足2次建库需要的样品。
二、项目运转周期
标准流程的运转周期约为60个工作日(20对以上样本需额外增加时间)。
三、项目合格指标
产生不低于合同规定的clean data。
数据分析内容:
1. 标准信息分析 2. 定制化信息分析(需要mRNA表达量数据,并且需要根据样本数量等进行评估)
1)CNC(coding-non-coding)共表达注释;
2)Pathway富集分析;
3)结合客户的需求,协商定制其它定制化信息分析内容。
样品要求
1)样品类型:细胞、新鲜组织或RNA样品。
2)样品量:细胞样品请提供至少1×10^7个细胞,组织样品请提供至少300mg的组织块或切片,RNA样品请提供10 μg以上的总RNA。
3)样品质量:RNA无明显降解,提取的总RNA OD260/280值在1.8~2.2之间,浓度≥ 500 ng/μl,28S:18S ≥ 1.5,RIN ≥ 7。
4)样品保存:细胞样品或新鲜组织块(切成~50mg的小块)可用TRIZOL或RNA保护剂处理或液氮冻存后,-80℃保存。RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中,-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融。
5)样品运输:样品置于1.5 ml管中,封口膜封好,干冰运输。