派洛摩尔发展了一种专有技术(专利申请号:US60/839,761 & PCT/US07/76799),在无血清条件下
利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中生产AAV载体,一般来说,整个AAV生产过程需要6周时间(见下
图)。对于顾客定购少于5.0乘于10的14次方 vg 量的,摇瓶培养即可生产,对于定购大于5.0
乘于10的14次方 vg 量的,就要用到波生物反应器,更大的量将需要更多的时间用于杆状病毒
种子扩增和AAV纯化。
步 骤 | 描 述 | 预计所需时间 |
1 | 克隆目的基因到pFB-AAV穿梭质粒 | 1―2 周 |
2 | DNA杆粒的传代和杆粒DNA的纯化 | 1 周 |
3 | 转染Sf9细胞产生杆状病毒 | 1 周 |
4 | 杆状病毒的扩增和滴定 | 1 周 |
5 | AAV的生产和CsCl纯化 | 1 周 |
6 | 脱盐、过滤CJ和AAV的滴定 | 2 天 |