miRNA过表达,miRNA 过表达载体
通过人工干预提高细胞内miRNA的表达水平是miRNA研究Z常用的技术手段。研究者可以通过转染miRNA类似物(miRNA mimic)
或pre-/pri-miRNA表达质粒以提高细胞内miRNA水平。研究表明,转染含有pre-miRNA及其两端侧翼序列(各100-200 bp)的
pri-miRNA表达载体,能在程度上模拟miRNA在体内的合成过程,因此被众多研究者青睐。Geneup公司设计的miRNA过表达
载体,分为组成型和诱导型两类。
(一)miRNA过表达载体1. pLVc-200 (pLVc/CMV-EGFP.miRNA):miRNA组成型过表达载体
载体特征: - 用CMV启动子驱动下游标记蛋白EGFP及miRNA的共表达;
- 共表达的EGFP可快速便捷地检测转染或感染效率;
- 既可用于瞬时转染,也可包装成慢病毒感染细胞;
- 与第四代慢病毒包装质粒匹配,可制备高滴度慢病毒颗粒;
- 含有嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选基因,可筛选稳定表达细胞系。
载体图谱:2. pLVi-201 (pLVi/TRE3G-RFP.miRNA):miRNA诱导型过表达载体
载体特征: - 将新一代四环素反应元件(TRE3G)和四环素激活因子(TetON3G)反向克隆到同一慢病毒载体,能显著提高诱导效果,并降低本底;
- 用红色荧光蛋白(RFP)作为报告基因,只有在添加QL霉素(DOX)情况下,RFP及其下游的miRNA才能共表达;
- 既可用于瞬时转染,也可包装成慢病毒感染细胞;
- 与第四代慢病毒包装质粒匹配,可制备高滴度慢病毒颗粒;
- 含有嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选基因,可筛选稳定表达细胞系。
载体图谱:3. pLVi-202 (pLVi/TETO7-RFP.miRNA):miRNA诱导型过表达载体。
载体特征: - 将第三代四环素反应元件(TETO7)和四环素激活因子(rtTA3)同向克隆在慢病毒载体;
- 用红色荧光蛋白(RFP)作为报告基因,只有在添加QL霉素(DOX)情况下,RFP及其下游miRNA才能共表达;
- 既可用于瞬时转染,也可包装成慢病毒感染细胞;
- 与第四代慢病毒包装质粒匹配,可制备高滴度慢病毒颗粒;
- 含有嘌呤霉素(Puromycin)抗性筛选基因,可筛选稳定表达细胞系。
-
miRNA过表达载体文库 本公司已经完成了700多个Z常见人源pri-miRNA过表达载体的构建,且数目在逐渐增加。Geneup公司将根
据您的需求,提供质粒或包装好的慢病毒颗粒,并承接稳转细胞系构建等技术服务。
miRNA过表达,miRNA 过表达载体应用实例实例1 miRNA的组成型过表达:
图21.分别将miR-9和miR-210的组成型过表达载体包装成慢病毒后,感染A549细胞,3天后通过S-Poly(T)法检测miRNA过表达水平,对照为不含miRNA序列的pLVc-EGFP。
实例2 miRNA的诱导型过表达:
图22. 将miR-20a的诱导型过表达载体pLVi/TRE3G-RFP.miR20a包装成慢病毒后感染A549细胞,感染3天后用DOX诱导处理,比较诱导不同时间后miR-20a的过表达水平
更多关于今发展生物产品的信息,
请查看: www.geneups.com
本次活动解释权归今发展生物科技有限公司所有
深圳市今发展生物科技有限公司
Email: service@geneups.com
温馨提示:不可用于临床ZL。