新型血清/血浆miRNA提取试剂盒 S/P RNAiso kit

 S/P RNAiso kit能从血清、血浆中GX回收小RNA，回收率比传统方法提高4倍以上；
预混的spiked-in cel-miR-54可用作定量检测的内参。

新型血清/血浆miRNA提取试剂盒（ S/P RNAiso kit）实验数据


图. 用三种不同提取试剂盒提取血清RNA后， qRT-PCR技术比较RNA的分离效果

miRNA提取试剂盒：


新型血清/血浆miRNA提取试剂盒（ S/P RNAiso kit）使用方法:

1. 取1 ml miRSOL，加入100 μl体液样本，吹打混匀，室温静置5分钟。

注：样本与miRSOL混合时若产生析出物，应反复吹打至析出物完全溶解，否则会严重降低miRNA回收率。

1. 加入200 μl氯*仿，盖紧离心管盖，剧烈振荡20秒（注意防止管盖弹开）；
2. 室温静置5分钟。
3. 12,000 g，4℃离心15分钟。小心取出离心管，此时匀浆液分为三层，即：无色的上清液（含miRNA）、中间的白色蛋白层、及有颜色的下层有机相。
4. 吸取500 μl上清液转移至另一新的1.5 ml离心管中（切勿吸出白色中间层）。
5. 向上清液中加入5 μl miRCOP，再加入与上清液等体积的异丙醇（505 μl），上下颠倒充分混匀，-20℃或-80℃静置至少10分钟。

注：当样本是组织或是体外培养细胞时，可不加入miRCOP。

1. 13,500 g，4℃离心10分钟。
2. 弃去上清液，向沉淀中加入1 ml的75%乙醇，轻轻颠倒清洗沉淀。
3. 13,500 g，4℃离心5分钟，完全弃去上清。如管壁上沾有残余溶液，应再次离心并弃尽上清。
4. 沉淀室温干燥2~3分钟，加入23 ul RNase-free水溶解，溶解产物置于-80℃储存，或者直接进行miRNA的荧光定量PCR检测。

注：[1] 溶解的RNA中含有miRCOP，可能对RNA的吸光值有一定干扰，可用RNase-free水代替体液样本同步提取，并作为吸光值测定的空白调零；miRCOP对PCR或荧光定量PCR反应无影响；[2] 为节省样本和简化操作，检测多个样本时建议各个样本取相同体积的RNA进行PCR反应；[3] 提取的血清总RNA中含有spiked-in cel-miR-54，可作为荧光定量PCR的归一化内参；[4] 推荐使用本公司的S-Poly(T) miRNA qPCR-assay试剂盒进行miRNA的荧光定量PCR检测。

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