逆转录酶 核酸扩增(PCR)

名称：逆转录酶
英文名：M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
产地：国产|进口
规格：5000U
品Pai：百奥莱博
本品适用于链cDNA合成，cDNA 片段长度可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。野生型的M-MuLV包含RNase H活性，该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因而在cDNA 条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA，本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶，即M-MLV (H-) Reverse Transcriptase，与M-MuLV相比，不仅改善了模板RNA可能被降解情况，且具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。

注意事项

1）为保证反转录成功，建议使用高质量的RNA样品。
2）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
3）如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构，可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀，65℃变性5min，冰上冷却，短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。
4）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用方法

1条链cDNA合成（以20μl反应体系为例）
1.1 按照表【1】配制反应体系

RNase free ddH2O	to 20μl
5×Reaction Buffer	4 μl
dNTP Mixture (10 mM each)	1 μl
Oligo(dT)18(0.5μg/μl)
or Random hexamer (0.1μg/μl)
or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM)	1 μl
RNase inhibitor (40 U/μl)	0.5 μl
M-MLV (H-) Reverse Transcriptase	1 μl
模板RNA	Total RNA: 50ng-5μg mRNA: 5-500ng
表1 cDNA条链合成反应体系表

1.2 轻轻混匀
若使用Oligo(dT)18或基因特异性引物，42℃孵育50min。
若使用Random hexamer，25℃孵育10min，42℃孵育50min。

1.3 65℃加热15min失活M-MLV (H-) Reverse Transcriptase。

2 RT-PCR
建议取1/10～1/5体积（2～4µl）的反转录产物作为PCR模板。
2.1 按照【表2】配制反应体系表
组分 体积 终浓度

cDNA模板	2μl	依需要调整
Forward Primer (10μM)	1μl	0.2 μM each
Reverse Primer (10μM)	1μl	0.2 μM each
10×Taq Buffer(含Mg2+)	5 μl	1×
2.5mM dNTPs	4μl	0.2 mM
Taq DNA Polymerase	0.5μl	2.5units
ddH2O to final volume	50μl	/
表2 RT-PCR反应体系表

2.2 按下列条件进行PCR反应：


储存条件：-20℃。