克隆感受态JM110上海语纯生物科技有限公司是一家专注于研发生产高品质人体组织源及动物组织源原代细胞、细胞系、iPS细胞等产品,并提供专业技术服务外包的高新技术企业,公司总部位于上海。目前已经被各大高校列为指定合作商,上海交通大学、复旦大学、同济大学、上海中医药大学、浙江大学、上海第六人民医院、上海第十人民医院等。
克隆感受态JM110OP10感受态细胞基因型:
F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG
TOP10感受态细胞简要说明:用途:分子克隆和质粒提取。
TOP10菌株来源于MC1061菌株, 是目前实验室Z常用的感受态细胞之一,基因型与DH10B高度类似(DH10B为galE15型,而TOP10为galU型)。 TOP10生长速度快(比DH5α快,但比Mach1-T1生长速度慢),10小时可见克隆, recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取,可用于构建克隆,蓝白斑筛选等实验,具有链霉素抗性。 High5TM系列TOP10感受态细胞经特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg。
克隆感受态JM110TOP10感受态细胞操作说明书: 1.TOP10感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目 的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少13h。
TOP10感受态细胞注意事项: 1. 感受态细胞Z好在冰上融化。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或GX率的连接产物可相应减少用于涂板的菌量。
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