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技术概述
DNA pull down-MS是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,纯化出与DNA段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA段结合;做质谱鉴定即可筛选出与DNA段可能互作的蛋白信息(如具体某个或某些转录因子/组蛋白等)。
技术原理
生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度的非共价作用;其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后,利用生物素和链霉亲和素之间的亲和作用,可以纯化出各种生物大分子复合物。
DNA pull down实验首先针对靶标区域设计DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,纯化出与靶DNA段结合的蛋白复合体,洗脱得到DNA段的结合蛋白质。
技术应用
目的DNA段的互作蛋白(如转录因子等)筛选。
技术流程
服务信息
参考文献 1.A requirement for breast-cancer-associated gene 1 (BRCA1) in the spindle checkpoint. Proc Natl AcadSci U S A 101(49):17108-17113(2004).
2.Identification of DNA-binding proteins that interact with the 5'-flanking region of the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry. J Pharm Biomed Anal 116:94-100(2015).
活动声明
1、活动时间:2019.02.22—2019.03.22;非活动期间项目不享受相关优惠;
2、本活动解释权归广州辉骏生物科技有限公司所有。