特别提示：包括MMLV逆转录酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！
产品名称：MMLV逆转录酶
英文名称：MMLV Reverse Transcriptase
产品货号：BTN60905
产品规格：10000U
该酶是突变型的MMLV逆转录DNA聚合酶，从表达莫洛尼氏鼠白血病病毒reverse transcriptase基因(pol基因)的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为76.1KDa的单亚基组成，可催化以单链DNA、RNA或DNA:RNA杂交链为模板的互补DNA链的聚合反应。跟野生型相比,它没有RNase H活性。
产品特点;
1．延伸性能好，可合成长达12.5 Kb的fμLl-length cDNA。
2．zuì佳反应温度为42℃，但在50℃时仍然有活性，70℃10分钟能使其失活。
3．能以Cy3-，Cy5-，rhodamine-，aminoallyl-，fluorescein等标记的nucleotides 为底物。
4．可用于first strand cDNA 合成，second strand cDNA 合成，DNA labeling，RNA primer extension等。
5．与PCR 兼容，RT产物可以用于PCR和real-time PCR。
6．能被金属螯合剂，无机磷酸，焦磷酸和多胺YZ。
7．没有RNase H活性。
产品组成： | 成分 | 规格 |
| MMLV逆转录酶(200U/μL) | 50μl |
| 5×RT Buffer | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有限期一年。
使用方法：一、合成PCR用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:
| 加入物 | 加入量 |
总RNA
或poly(A)mRNA
或专一的RNA | 100-500 ng
10-500 ng
0.01pg-500ng |
| 注：RNA样品不能有基因组DNA污染。 |
Oligo(dT)18(0.5ug/μL)
或随机引物(0.2ug/μL)
或RNA模板专一性引物 | 1μL
1μL
15-20pmol |
| 注：随机引物于RNA模板的比例跟zuì后得到的cDNA的平均长度成反比 |
| RNase-free水 | 补水到12μL |
2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：
| 5×RT Buffer | 4μL |
| RNase Inhibitor(20U/μL) | 1μL |
| dNTP(10mM each) | 2μL |
4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。
二、合成建文库用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:
| 加入物 | 加入量 |
poly(A)mRNA
或专一的RNA | 1ug
0.5-1ug |
| 注：RNA样品不能有基因组DNA污染。 |
Oligo(dT)18(0.5ug/μL)
或随机引物(0.2ug/μL)
或RNA模板专一性引物 | 1μL
1μL
100pmol |
| 注：随机引物于RNA模板的比例跟zuì后得到的cDNA的平均长度成反比 |
| RNase-free水 | 补水到12μL |
2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：
| 5×RT Buffer | 4μL |
| RNase Inhibitor(20U/μL) | 1μL |
| dNTP(10mM each) | 2μL |
4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200 U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃。
我公司销售的MMLV逆转录酶，MMLV Reverse Transcriptase质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
温馨提示：不可用于临床ZL。
