circRNA RIP（RNA immunoprecipitation）实验

RNA免疫沉淀（RIP）运用针对目标蛋白质的抗体把相应的RNA-蛋白质复合物沉淀下来，经过分离纯化并对结合在复合物上的RNA进行测序或PCR分析。RIP可应用于研究miRNA调节靶点、RNA与RNP（RNA结合蛋白）的互作关系等。

实验流程：
1.细胞裂解
2.捕获RNA-蛋白复合物
3.洗脱
4.检测

 

实验实例：

以anti-SNRNP70为目的抗体，anti-IgG为对照抗体，在Hela细胞裂解样本中，进行免疫沉淀。免疫沉淀所得蛋白质样品，进行Western blot检测，input样本与目的样本在约70KDa大小位置有明显条带，阴性对照样本无条带。

免疫沉淀所得RNA以U1 snRNA特异性引物，进行RT-PCR分析，input样本与目的样本可见明显的PCR产物，指示SNRNP70富集U1 snRNA。

Western blot检测SNRNP70：