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2×Babuddy MasterMix(含染料)现货供应的品Pai:百奥莱博,是优质的核酸扩增(PCR)产品,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多2×Babuddy MasterMix(含染料)等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。
名称:2×Babuddy MasterMix(含染料)
产地:国产|进口
英文名:2×Babuddy MasterMix(With Dye)
品Pai:百奥莱博
规格:1ml|5ml
本品是由Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase、PCRBuffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶,具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的聚合酶其活性区域融合有一段聚合增强结构域,独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍,是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30s/kb,成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷,大大缩短了反应时间。
本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA,尤其在扩增>10 kb的DNA片段时,优势更加明显,所扩增的片段最长可达20 kb。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷,可ZD限度地减少人为误差和污染。
使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基,可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆,需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测,无需再使用上样缓冲液。
产品特点:
1、高保真性:保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍,普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快:其延伸速率为15-30sec/kb,成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段:扩增的片段长度可长达20kb。
产品组成:
组份 | 1ml | 5ml |
2×Babuddy MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml |
ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意:2×Babuddy MasterMix含有Babuddy DNA Polymerase,2×PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400μM dNTP mix。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 | 20μl反应体系 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×Babuddy MasterMix | 10μl | 25μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 1μl | 2.5μl | 0.5μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 2.5μl | 0.5μM |
Template DNA | 适量 | 适量 | <250ng |
ddH2O | up to 20μl | up to 50μl | |
a.模板:在50μl PCR反应体系中,DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA,λDNA等)1 pg- 10ng,高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b.引物:引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考,推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30 s-3 min | |
变性 | 98℃ | 5-10 s | 25-35 个循环 |
退火 | 45-72℃ | 10-30 s |
延伸 | 72℃ | 2-4 kb/min |
终延伸 | 72℃ | 5-10 min | |
a.变性:简单模板的预变性温度为98℃,预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板,预变性时间可延长至3分钟。
b.退火:使用本产品时,退火温度设定的基本原则是,当引物长度小于或等于20 nt时,退火温度为引物ZD的Tm;当引物长度大于20 nt时,退火温度应在ZDTm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时,应以ZD的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c.延伸:本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase的扩增效率为2-4 kb/min,复杂性低的模板可用4 kb/min,复杂性高的基因组DNA模板,延伸时间则应为2 kb/min,对于一些cDNA模板,延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d.循环次数:可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
当引物的退火温度较高时,建议使用两步法进行PCR扩增:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30 s-3 min | |
变性 | 98℃ | 5-10 s | 25-35 个循环 |
延伸 | 72℃ | 2-4 kb/min |
终延伸 | 72℃ | 5-10 min | |
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
关键词:2×Babuddy MasterMix,2×Babuddy MasterMix(With Dye),2×Babuddy MasterMix(含染料),WE0110
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编号 | 名称 |
WE0215 | 5×TBE |
WE0183 | 游离DNA提取试剂盒 |
WE0192 | 超纯RNA提取试剂盒 |
WE0401 | 组织样本RNA样品保存管 |
WE0394 | HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) |
WE0328 | Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒 |
WE0386 | HRP标记链霉亲和素 |
WE0186 | 鼠尾基因组DNA提取试剂盒 |
WE0374 | 罗丹明山羊抗大鼠IgG(H+L) |
WE0129 | 一步法RT-PCR试剂盒 |
WE0204 | 磁珠法游离DNA提取试剂盒 |
WE0104 | 2×Es Taq MasterMix(含染料) |
WE0263 | 酵母蛋白抽提试剂盒 |
WE0247 | TA快速连接试剂盒(pUC-T Simple)(含载体,连接酶) |
WE0271 | Protein A琼脂糖凝胶 |
|
WE0140 | 实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ) |
WE0367 | 罗丹明标记驴抗小鼠IgG(H+L) |
WE0314 | 免疫组化试剂盒(兔源一抗) |
WE0190 | 通用型柱式DNA提取试剂盒 |
WE0371 | 生物素化驴抗人IgG(H+L) |
WE0131 | GXcDNADY链合成试剂盒 |
WE0402 | 唾液DNA样本保存管 |
WE0303 | 显影粉 |
WE0171 | 固定组织基因组DNA提取试剂盒 |
|
WE0338 | 抗MBP标签单克隆抗体 |
WE0266 | His标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白) |
WE0145 | 实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(低含量ROX校正染料) |
WE0206 | 磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 |
WE0114 | 2×BaHF MasterMix(含染料) |
WE0198 | 动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I) |
WE0180 | 粪便基因组DNA提取试剂盒 |
WE0217 | 无RNA酶水 |
WE0320 | 封闭用正常山羊血清工作液(免疫组化封闭液) |
WE0125 | 高保真多重PCR Mix(下一代测序用) |
WE0327 | Alexa Fluor 488/PI细胞凋亡检测试剂盒 |
WE0165 | 酵母质粒提取试剂盒 |
WE0151 | 快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针) |
WE0109 | Babuddy超保真DNA聚合酶 |
|
温馨提示:不可用于临床ZL。