耐热逆转录酶II厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
 

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括耐热逆转录酶II厂家在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：耐热逆转录酶II厂家
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
英文名：Reverse Transcriptase II
规格：2000U
Reverse Transcriptase（第二代耐热逆转录酶）是Reverse Transcriptase（DY代耐热逆转录）的升级产品，是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过体外分子进化技术获得的全新耐热逆转录酶。与上一代相比，进一步大幅提高了热稳定性，50℃下半衰期超过240min，并长时间耐受55℃高温且保持稳定，非常适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。此外，增加了多个突变位点，进一步增强了模板亲和力和行进性，大幅提升全长cDNA的合成能力，可获得长达20 kb的cDNA。另外，对于常见的逆转录YZ物具有更高的耐受度，非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。

活性定义：以Poly(rA) Oligo(dT)为模板/引物，在37℃，10min内，掺入1 nmol的dTTP为酸不性溶物质所需要酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 ºC下孵育1h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本品和1 μg小鼠肝脏总RNA在37 ºC下孵育1h，RNA电泳谱带不发生变化。
功能检测1：逆转录体系中加入200 U本品，以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，50 ºC反应30min。取10% cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
功能检测2：逆转录体系中加入200 U本品，以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23为引物，55 ºC反应45min。取10% cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测3：逆转录体系中加入200 U本品，以1 pg-1 μg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)23VN和Random Hexamers为引物，测试qRT-PCR 性能。以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线，R2>0.990，斜率在-3.20到-3.60之间。

准备工作
1. 防止RNase污染：请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。
2. 引物选择：
2.1 后续实验为PCR
a, 如果模板为真核生物来源，一般情况下Oligo dT18，与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对，可获得ZG产量的全长cDNA。
b, 基因特异性引物 (GSP)的特异性ZG。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导DY链cDNA合成。这时，可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
c, Random hexamers特异性ZD，所有RNA，包括mRNA, rRNA, tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random hexamers为引物。
2.2 后续实验为qPCR
a, 将Oligo dT18与Random hexamers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。

欲咨询购买耐热逆转录酶II厂家，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·Elk1-GFP报告基因质粒
编号：SY0212
英文名称：Elk1 GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
ELK1-GFP报告基因是用于检测ELK1转录活性水平为目的的报告基因。ELk1(ETS domain-containing protein )是一种三元复合因子，是ETS家族的一类。它在各种生理活动中具有重要的作用，包括长期记忆的形成，药物成瘾，老年痴呆症，唐氏综合征，乳腺癌，和抑郁症。

ELK1-GFP报告基因主要应用于MAPK信号通路的研究、药物研究以及相关基因的调控和功能的研究等。

pGMELK1-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ELK1结合位点，可以GX地检测ELK1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得ELK1-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM ELK1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMELK1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

·慢病毒报告基因阳性对照
编号：SY0152
英文名称：Lentivirus Luciferase Reporter positive control
规格：50μl×4管；2×10e7TU/ml
pGMLV-CMV-Lu慢病毒质粒是以CMV作为启动子，启动Luciferase在细胞内的表达，可作为萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）报告基因的阳性对照使用，通过对质粒上可以被预测出的转录因子结合位点全部进行适当的突变处理，使质粒对转录因子的非特异结合降到了ZD。采用慢病毒作为报告基因的优点在于它能够感染多种难感染的细胞，比如原代细胞，干细胞，神经元细胞等。同时，慢病毒可以将携带的外源基因插入细胞的基因组中，进行长时间的表达。

质粒图谱



注意事项
1）病毒操作时使用生物安全柜，如使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开风机。
2）病毒操作时请穿实验服，带口罩和乳胶手套。
3）操作病毒时必须特别小心，不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染，立即用10%次氯酸钠溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸钠溶液浸泡1h以上后弃去。
4）用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前，用70%乙醇清理实验台。
5）病毒操作完成后，用肥皂清洗双手。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

储存条件：-80℃。


耐热逆转录酶II厂家关键词：SY0294,耐热逆转录酶II,Reverse Transcriptase II


·溶酶体黄/蓝色荧光探针
编号：SY0594
英文名称：Lysosome Yellow/Blue DND-160 (PDMPO)
规格：50μl
本系列探针是对活细胞中的酸性区室（如溶酶体、顶体精子）pH值进行检测的一类荧光探针，该类探针的染色具有向酸性，可通过质子化作用在酸性细胞器内累积。该类探针的这种向酸性可解除染料的荧光淬灭性，使其所发射的荧光强度更强。因此，本系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。

本品是一种用于测定溶酶体pH值的比率测量型探针，也是系列探针中WY的一种pH依赖型显示双激发和双发射波长的荧光探针，该探针在中性环境中产生蓝色荧光，但当所处环境变为偏酸性时，则发射黄色荧光。本品以溶于无水DMSO的1mM储存液形式提供。

分子式：C20H22N4O3
分子量：366.4188
Ex/Em：329⁄440
pKa：～4.2
储存条件：-20℃干燥，避免反复冻融，有效期6个月
结构式



·淋巴细胞分离液1.077
编号：SY0532
英文名称：Lymphocyte Separation Medium 1.077
规格：100ml
淋巴细胞分离液（Lymphocyte Separation Medium，简称LSM）是一种无菌的即用型分离液，基于Böyum的Ficoll-甲泛影钠溶液做过一些改良，使得操作简单快速且分离效率更高。每100 ml淋巴细胞分离液中含有6.2 g 聚蔗糖（Ficoll）和9.4 g 泛影酸钠，20℃下的密度为1.0770-1.0800 g/ml。不仅适用于外周血淋巴细胞，也可分离其他组织来源的淋巴细胞，包括脐带血和细胞。

工作原理
去纤维蛋白或肝素化人血以1：1的比例用生理盐水或平衡盐溶液稀释，加在分离液上层，之后低速离心30 min。在离心过程中，差速迁移使其ZZ形成几个细胞分层。聚集在管底的颗粒主要是红细胞和多形核粒细胞，通过梯度迁移至管底。根据其密度的大小，淋巴细胞和其他单个核细胞如单核细胞，以及血小板分布在血浆和LSM两层之间。淋巴细胞可以通过吸取分界层溶液回收，并通过进一步清洗来去除血小板，LSM和血浆。

操作方法
注：此操作流程适用于去纤维蛋白或抗凝血剂处理过的人血。对于其他物种或者其他组织的血液，可能需要对此步骤做出一定的改进。



1）轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合；
2）无菌条件转移3 ml LSM到15 ml离心管中；
3）用2 ml 生理盐水混合2 ml去纤维蛋白血液或肝素化血液；
4）小心将稀释血液加入3 ml LSM（室温即可）的上层，使得在血液和LSM间形成一个明显的分层。不要将稀释血液混入LSM中；
5）室温下400g离心15-30min，离心可以沉淀红细胞和多形核白细胞，同时可以在LSM上形成一层单核-淋巴细胞分层，如下图所示（从上到下，依次分为血浆层-淋巴细胞层-LSM层-RBC颗粒）；
6）吸出淋巴细胞层上方2-3 mm内的血浆；
7）吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM层，并转移到另外一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至离心管内的淋巴细胞层中，室温离心10 min，离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞的范围，例如160 – 260 g（清洗去除LSM和降低血小板含量）；
8）用平衡盐缓冲液再清洗细胞一次，ZH取适当的培养基重悬细胞。

注意事项
1）稀释去纤维蛋白血液或肝素化血液用的生理盐水为无菌液体。
2）为保持淋巴细胞的活性，应该采血后尽快进行分离。分离细胞层实际上是单个核细胞层，包括淋巴细胞和单核细胞。
3）若溶液变浑浊，呈现出不同的黄色或可能有受污染迹象，不可再使用。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


耐热逆转录酶II厂家关键词：SY0294,耐热逆转录酶II,Reverse Transcriptase II

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