1、肿瘤细胞培养问题：问：我养的肿瘤细胞，传多少代以后不能用、需要重新复苏新的呢？我总觉得细胞形态不好，但长的还挺快！
答：初代培养的细胞在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，为保持二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。如不冻存，则需反复传代以维持细胞的适宜密度，以利于生存。但这样就有可能导致细胞失掉二倍体性质或发生转化。一般情况下当传代10-50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止。组织和细胞在培养中生命期如何，这要看细胞的种类、性状和原供体的年龄等情况。如人胚二倍体成纤维细胞培养，在不冻存和反复传代条件下，可传30-50代，人胚肺成纤维细胞可传50代±10代，人胚肾只有8-10代，人胚神经胶质细胞15-30代等。而肿瘤细胞系多由癌瘤建成，多呈类上皮型细胞，常能传几十代或百代以上，具有永生性及异体接种致瘤性等特点，但随着传代次数的增多，细胞增殖也会逐渐缓慢，形态亦会变化。另外，看看你的培养条件是否严格按照该肿瘤细胞的要求进行，条件变了细胞亦会适应新的环境而发生改变。可试SY质量好的进口血清培养，看细胞长的如何。
2、HepG3B细胞问题：问：HepG3B细胞是一种什么细胞？与HepG2细胞有何区别？听说是本身就有乙肝病毒感染的，请问病毒的基因型和血清型是什么？能分泌表面抗原和e抗原吗？需要加G418吗？
答：HEP-3B human hepatocellular carcinoma established from the tumor tissue of an 8-year-old black boy in 1976;description: cells contain integrated hepatitis B virus genome;cells were described to produce a variety of proteins,e.g. alpha-fetoprotein, albumin,transferrin,alpha2-macroglobulin,alpha1-antitrypsin,haptoglobin and others;patented cell line;this cell line has been assigned by the ZKBS (German Central Commission for Biological Safety)to risk category 2 confirmed as human with IEF of AST, MDH,PEP B.
Viruses:ELISA:reverse transcriptase negative;PCR:EBV-,HCV-,HIV-,HTLV-I/II-.
HepG2普通的肝癌细胞，没有HBV整合。HEP-3B 培养不用加G418。
3、顺铂的保存问题：问：从肿瘤医院买来的顺铂注射液，拿来的时候没有避光，大约有2小时，我想请教一下：不避光2小时对顺铂影响大吗？还可以用吗？还有，我应该怎么保存，4度避光保存，对吗？利用顺铂研究细胞凋亡，应该怎么配制溶液，配好可以维持多长时间不失效？
答：不避光2小时对顺铂影响不大，可放到4度避光保存。可以用生理盐水配制成10-40μg(具体视实验而定)，可以放至少半年左右不失效。
4、HIT-T15细胞的培养问题：问：请教HIT-T15细胞的培养方法，可以加入GETAMICINE等抗生素避免感染吗？请上传一些图片。在显微镜下会看到黑色的点，是不是被污染了呢？
答：在配制HIT-T15细胞培养基时，加入青霉素和链霉素两种抗生素就可以避免感染。显微镜下不应该看到黑点，典型的图片可以在ATCC的网上可以查看。
5、问：病毒的冻存和解冻的具体方法？答：具体不知道，给一点资料希望对你有帮助吧！一些化学物质如甘油、蔗糖、谷氨酸钠等，能够减轻病毒在保存过程中其它理化因子对病毒的损伤，达到保持病毒的感染性、抗原性等生物活性：
(1)甘油——它是一种广泛使用的病毒保护剂，一般采用50%甘油盐水中，大多数细菌内杀灭但病毒却存活几十天、几个月、几年。
(2)二甲基亚砜——可以减少冷冻过程中微小冰晶的形成，因此对冻存的病毒有保护作用。
(3)病毒冻干保护剂——常用的有明胶、血清、胨、白蛋白、谷氨酸钠、葡萄糖、蔗糖等。它们对病毒的保护作用是多方面。如5-10%的糖类等低分子物质是通过使干燥样品的ZZ水分不致过低，防止蛋白质变性；而高分子物质则能促进病毒制品在冻干过程中的升华干燥，当冻干的病毒加水复原时，还能提高溶解性。
6、诱导培养基的问题：问：最近养前脂肪细胞，需要诱导成脂肪细胞，关于诱导剂，有些问题想请教！
(1)诱导剂需要胰岛素和氢化可地松，去sigma的网站查了查，发现仅牛胰岛素就有6种，其中有两种写明用于细胞培养，应该用哪种药品？
(2)关于诱导剂胰岛素的配置说明中让用PH<2的冰醋酸配置，论坛中很多做过的朋友说用乙醇配置，是都可以么？会对后续实验有什么影响吗？
(3)诱导剂都是单独配置好浓储，保存在-20度里，用的时候现加到培养基中的吧(像单独加谷氨酰胺一样)？还是直接和培养基配置成诱导培养基，然后保存在４度里？
答：(1)I6634。(2)我们实验室用的是0.01M HCl配制的。(3)前者：个人认为每次用量比较少，没有必要配成储液，另外四度中诱导剂也比较容易被氧化(Mix)。
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