一站式TA克隆试剂盒

中文名称：一站式TA克隆试剂盒

英文名称：One-Stop AT Cloning Kit

规格：20

运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一

年。感受态细胞需要干冰运输， -

70℃保存，有效期6个月

一站式TA克隆试剂盒产品及特点

AT克隆就是利用T载体两个3'端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3'端各

带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过

程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。其原理如下：

一站式TA克隆试剂盒本产品提供了完成AT克隆的所有成份，具有下列特点：

1. 一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行AT克隆。

2. T载体由Xcm I酶切方法制备，两个5'端含T突出，自连率几乎为零。

3. 克隆效率高，一次AT克隆实验一般能得到上百个重组子。

4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。

5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。

6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点（如Bst ZI、Eco RI、Not I），便于对克隆

的PCR片段进行近一步的分析。

7. 克隆位点两侧分别有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备

RNA探针。

8. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。

9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。

10. 含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

使用及效果

将1 μ L载体、1.5 μ L对照插入片段、2 μ L溶液A、1 μ L溶液B混合，加水到10

μL，16℃保温30分钟到过夜，65℃5分钟灭活连接酶。取5 μL转化100 μ L感受态

细胞即可。涂盘得到的菌落用于提取质粒DNA，用Eco RI酶切质粒，有1.5K插入片

段的就是重组子