蛋白激光辅助解析串联质谱鉴定（MALDI-TOF-TOF）

MALDI-TOF技术

MALDI-TOF技术主要对单一蛋白质（考/银染的2D或DIGE胶点样本）或成分比较简单的蛋白混合液进行定性分析。

技术原理

MALDI-TOF技术——利用基质辅助激光解吸电离（MALDI）/飞行时间（TOF）技术来表征生物分子，基质辅助激光解析（MALDI）技术是将样品均匀包埋在基质中，基质吸收激光提供的能量而蒸发，携带部分样品分子进入气相，并将一部分能量传递给样品分子使其离子化。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比，从而检测离子MALDI-TOF在分子量可测范围内，分辨率和所测分子量的准确性等方面都优于同类技术。采集数据渐变，大大简化从样品制备到数据分析的过程。在windows操作界面下通过鼠标来改变参数，变化激光强度和编制报告。可分别调节离子，加速栅和反射器电压等，控制样品的位置和激光照射的轻度。高准确度的质量数据增强了数据库的查询能力，可减少测量参数和鉴定结构所需的实验数据。分析能力强-温和的离子化条件增强了测量生物多具体，蛋白质，肽和DNA的能力。 
 

MALDI-TOF/TOF仪器结构原理图

实验流程

仪器型号

MALDL-TOF/TOF质谱仪4800（ABI）,布鲁克ultrafleXtreme MALDI TOF/TOF

技术优势

适合较纯、成分简单或单一的蛋白样品，如银染或考染的蛋白胶点、标签纯化的蛋白样品

周期短

应用领域

蛋白质或多肽的鉴定分析

样品要求

1.双向凝胶电泳点：考染、银染（质谱兼容）点清晰可见；

2.蛋白质溶液：单一蛋白质，纯度>90%，蛋白总量>5μg，浓度>0.1μg/ul；

3.SDS-PAGE条带：单一蛋白质，纯度>90%，考染、银染（质谱兼容）点清晰可见；