双链腺相关病毒（scAAV）包装技术

一、概述
    腺相关病毒（AAV）属微小病毒（parvovirus）家族的成员，为无包膜的单链线状DNA病毒。AAV的基因组约4700bp，包括上下游两个开放读码框架（ORF），位于分别由145个核苷酸组成的2个反向末端重复序列（ITR）之间。
    基因组中有3个启动子（P5、P19和P40）和2个开放阅读框（ORF），rep和cap，如图1所示。rep编码4个重叠的多功能蛋白，即Rep78、Rep68、Rep52和Rep40，其中Rep78与Rep68参与AAV的复制与整合，Rep52和Rep40具有解螺旋酶和ATP酶活性，与Rep78、Rep68共同参与单链基因组的复制；cap编码的VP1、VP2、VP3、是装配成完整病毒所需要的衣壳蛋白，它们在AAV病毒整合、复制和装配中其重要作用。

AAV基因组结构示意图

将野生型的腺相关病毒基因组初步改造后，可包装形成单链DNA AAV（single-stranded AAV, ssAAV）病毒。
双链AAV病毒（self-complementary AAV,scAAV）是在ssAAV基因组右侧ITR改造后，可包装形成自身互补的双链AAV病毒，基因表达更为快速，表达水平更高。
AAV感染细胞后，需要有一个由单链转变为双链的过程，病毒DNA第二链的合成已被证明是病毒基因表达的限速步骤，直接影响到病毒的感染效率。在scAAV基因组中，右边的ITR删除了一个D序列（包装信号），并且末端解链位点突变（∆trs），它能够阻止Rep蛋白修饰调节解链切口，增强自我互补双链DNA的包装。双链AAV病毒进入细胞后，不需要一个由单链变为双链的过程，可以直接表达，而且表达水平相对较高。非常适合应用在要求目的基因快速表达且需要较高表达水平的基因ZL方案中。
二、scAAV质粒系统
注：scAAV包装容量不能超过1.4kb。
并且百恩维生物有AAV1~9、DJ等10种血清型可供包装选择，能满足客户的各种实验要求。
    
          scAAV穿梭质粒                       scAAV包装质粒
  
         scAAV辅助质粒                         GFP对照质粒

三、百恩维生物scAAV包装技术路线


您只需给我们提供详细的基因信息，选定的所需的血清型，我们就能为您提供高滴度的scAAV病毒，滴度高达1013vg。
另外百恩维生物经过鉴定与质量控制：载体测序鉴定、Q-PCR测定滴度、感染活性测定等，保证给您提供的病毒正确可靠。