普林斯顿 PCR ST (single tube)试剂盒

快速、清洁、成本低、效率高

      PSIΨClone PCR ST (single tube)试剂盒是一种用于纯化PCR反应扩增产物的试剂盒 PSIΨClone PCR ST（单管）试剂盒以便利的单管离心形式为研究者提供了一种快速处理PCR反应产物的方法。运用这种方法快速获得的高产量、高纯度的DNA可直接应用于其它分子生物学研究。
      PCR反应得到的DNA片断（从100bp到10kb）可以与试剂盒中提供的离心管中的膜结合。随后经过清洗步骤除去残余的引物、核苷酸、酶和盐类。随后可以用低盐缓冲液把DNA洗脱 下来，DNA的浓度较高可不作任何处理直接应用于进一步的研究。
     PCR扩增反应产物中残余的引物、 核苷酸、酶和盐类会影响分子研究（如克隆、 测序等）。PSIΨClone PCR ST可以以简便的单管形式有效地去除这些残余的反应物。这些纯化的扩增产物可以直接用于测序或者亚克隆。

方便：
   z 12分钟之内处理完样品
   z 样品体积可以达到150ul
   z 可以使用很多实验室中常见的微型离心机
灵活：
 
   z 对于标准的和更小的片断一样能处理好
   z 纯化出的扩增产物可以直接用于测序和亚克隆

GX：

   z 极好地回收大于100bp的片断
   z 有效地去除引物、盐类、核苷酸和蛋白
   z 高浓度回收DNA

其它必须的材料或仪器：
 
   95％的乙醇或者纯乙醇、离心机。

试剂盒的组分及其制备（见后页的储存条件）
 
   PCR离心管：所提供的离心管可直接使用。
   结合缓冲液：这种溶液在低于22℃时会产生结晶。如果存在结晶，则将其加热至50℃融解。
   清洗缓冲液：所提供的清洗缓冲液是高浓度的，使用前需用乙醇将其稀释至乙醇终浓度为75-80%。请参见上面的说明。
   洗脱缓冲液：可直接使用。
   清洗管：所提供的清洗管用于结合和清洗步骤。
   样品收集管：所提供的管用于一步洗脱时。
   PSI Clone PCR DNA纯化试剂盒所提供的试剂足以满足对标准的PCR反应进行75次DNA分离的需要。
 
操作流程：
    1. 清洗缓冲液的浓溶液（＃2）使用之前加入48ml乙醇（95-）稀释。
   2. 1体积的PCR反应物1,2中加入1体积的PCR结合缓冲液1,2，震荡充分混匀。
   3. 将一个 PCR柱置于一个 2ml 的清洗管中，将DNA混合
   4. 物加到PCR柱中过滤，8000g下离心30-60秒。弃去流出的液体。
   5. PCR柱中加入400ul PCR清洗缓冲液（已用乙醇稀释），8000g离心30-60秒。弃去流出的液体。
   6. 重复步骤3一次。保证膜完全控干。
   a.（可选）在第4步中将PCR柱重新离心倒干残余的清洗缓冲液。
   7. 加入50-65ul PCR洗脱缓冲液，孵育2-5分钟，确保缓冲液浸入膜中。
   8. 将PCR柱置于一个不含DNAase（高压灭菌）的收集管中，8000g离心30-60秒收集洗脱液。弃去PCR柱，保留洗脱液。

注释：
   1. 使用这程的扩增产物的范围在150bp-10kb
   2. 如果片断处于 70bp-150bp之间，需要修改流程的第1步。用5体积的PCR结合缓冲液加到1体积的PCR反应产物中。另外结合缓冲液必须使用目录编号为PC-503的60ml装的结合缓冲液.

各组分储存条件：
组分                            储存条件
PCR离心管                   室温保存，保质期不限
结合缓冲液（Buffer #1）    2 2°C 以上避光保存，保质期见标签说明
清洗缓冲液（Buffer #2）       室温保存，保质期见标签说明
洗脱缓冲液（Buffer #3）       室温保存，保质期见标签说明
清洗管                   室温保存，保质期不限
样品收集管                 室温保存，保质期不限
故障排除：
流程中的清洗步骤有问题时可能会导致片断的回收效率低。
1. 检查清洗缓冲液（＃2）中是否加入乙醇。
2. 在加入洗脱缓冲液之前完全控干离心管。