南京信帆生物有专门的生物实验室,和一批专门从事western blot试验的技术人员。为客户提供的WESTERN BLOT服务都是由拥有丰富经验技术人员去操作每一项的实验,确保实验效果,过程稳定,结果可靠真实。
免疫印迹(western blot) 是根据抗原抗体的特异性结合来检测复杂样品中的某种蛋白的方法,它通过电泳把分离的蛋白质组分从凝胶转移至一种固相支持体,通过抗体与附着于固相支持物的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应进行检测。western blot的灵敏度能达到放射免疫分析的水平而又无需对蛋白进行放射性标记;此外,由于蛋白质的电泳分离几乎总在变性条件下进行,因此,溶解、聚集以及蛋白的共沉淀等诸多问题全部可以解决了;对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。
样本制备及注意事项:1. 悬浮细胞: 取大约1×107个细胞,低速离心收集,弃去培养液,加入1ml PBS悬浮细胞,转入小离心管中,低速离心沉淀细胞,弃去PBS,放入-70℃ 冰箱保存。干冰运输。2. 贴壁细胞:取大约1×107个贴壁细胞,胰酶消化后加入PBS悬浮细胞,低速离心收集,弃去液体,加入1ml PBS悬浮细胞,转入小离心管中,低速离心沉淀细胞,弃去PBS,放入-70℃冰箱保存。干冰运输。3.组织:采集新鲜组织(注意:生物体死亡后10分钟内取材料并保存好),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,切为小块,放入液氮或-70℃冰箱中保存,干冰运输。
客户提供
新鲜或正确保存的蛋白样品, 检测目的蛋白的一抗(或由本公司代购)。样品要求为:
1、裂解样品总蛋白量>500ug/样品。
2、细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml。
3、组织样品总蛋白浓度>10-15mg/ml。
结果及数据提供
我们提供
(1)实验所需试剂
(2)电泳Marker或发光Marker、HRP标记二抗(发光Marker需另收费用)。
(3)详细的实验方法资料。
(4)原始胶片。
结果及数据提供
内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张,可提供扫描图,实验报告,包括整个试验流程所涉及的实验数据和实验步骤。
说明
1、建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织)作为阳性对照。
2、每张膜检测1-8个样品。
3、如果一抗由客户提供,请在正确条件下保存,避免污染及反复冻融。