一站式平末端克隆试剂盒20 次_详细资料

产品信息

一站式平末端克隆试剂盒20 次存放时间不能超过该温度下的Z长存放时间，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在 4℃放置过夜后再转移到的温度。

一站式平末端克隆试剂盒20 次运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需一站式平末端克隆试剂盒20 次根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
一站式平末端克隆试剂盒20 次产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由大肠杆菌 K12 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
猪血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA KitPig Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA KIT
猪血管紧张素转化酶2(ACE2)ELISA KitPig Angiotensin converting enzyme 2,ACE2 ELISA Kit
猪血管紧张素转化酶(ACE)ELISA KitPig Angiotensin Converting Enzyme,ACE ELISA Kit
猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA KitPig angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA Kit
猪血管活性肠肽(VIP)ELISA KitPig Vasoactive Intestinal Peptide,VIP ELISA Kit
猪旋毛虫IgG抗体(Trichinella IgG Ab)ELISA KitPig Trichinella IgG antibody ELISA Kit
猪胸腺肽β4（Thymosin β4）ELISA KitPig Thymosin β4 ELISA Kit
猪心型脂肪酸结合蛋白(FABP3/FABP11/MDGI)ELISA KitPig Fatty acid-binding protein, heart,FABP3 ELISA kit
猪心钠肽(ANP)ELISA KitPig Atrial Natriuretic Peptide,ANP ELISA Kit
猪心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)ELISA KitPig cardiac isoform of Tropnin T,cTnT ELISA Kit
猪酰基辅酶A去饱和酶(SCD)ELISA KitPig Acyl-CoA desaturase,SCD ELISA kit
猪细胞色素C氧化酶(COX)ELISA KitPig cytochrome C oxidase,COX ELISA kit
猪细胞色素c还原酶(CCR)ELISA KitPig cytochrome c reductase,CCR ELISA kit
猪细胞间粘附分子2(ICAM-2)ELISA KitPorcine intercellular adhesion molecule 2,ICAM-2 ELISA Kit
猪戊糖素(PE)ELISA KitPig pentosidine,PE ELISA kit
猪瘟抗体(CSFV)ELISA KitClassical Swine Fever Virus Antibody ELISA Kit
猪瘟抗体(IgM)ELISA KitPig Anti-CSFV Antibody IgM ELISA Kit
猪瘟抗体(IgG)ELISA KitClassical Swine Fever Virus Antibody IgG ELISA Kit
猪胃泌酸调节素(OXM)ELISA KitPig oxyntomodulin,OXM ELISA kit
猪伪狂犬病毒(PRV)抗体(IgG)ELISA KitPig pseudorabies virus(PRV)antibody(IgG)ELISA kit
猪维生素D(VD)ELISA KitPig Vitamin D,VD ELISA kit
猪铁蛋白(FE)ELISA KitPig ferritin,FE ELISA Kit
猪糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)ELISA KitPig Glycated hemoglobin A1c,GHbA1c ELISA Kit
猪胎球蛋白A(FetuinA)ELISA KitPig Fetuin A ELISA Kit
猪胎盘生长因子(PGF)ELISA KitPig Placenta growth factor,PGF ELISA kit
猪水通道蛋白4(AQP-4)ELISA KitPig Aquaporin 4,AQP-4 ELISA Kit
猪水通道蛋白1(AQP-1)ELISA KitPig Aquaporin 1,AQP-1 ELISA Kit
猪双氢睾酮(DHT)ELISA KitPig Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit
猪输血传播病毒/辛型肝炎病毒抗体(IgG)ELISA KitPig transfusion transimitted virus/Hepatitis H virus antibody(IgG)ELISA Kit
猪生长抑素受体5(SSR5)ELISA KitPig Somatostatin receptor 5,SSR5 ELISA Kit
猪生长激素YZ素受体5(SSTR5)ELISA KitPig Somatostatin receptor type 5,SSTR5 ELISA kit
猪生长激素受体(GHR)ELISA KitPig growth hormone receptor,GHR ELISA Kit
猪生长分化因子9(GDF9)ELISA KitPig Growth/differentiation factor 9,GDF9 ELISA kit
一站式平末端克隆试剂盒20 次猪肾素(Renin)ELISA KitPig Renin ELISA Kit
猪神经型一氧化氮合成酶(nNOS)ELISA KitPig Neuronal Nitric Oxide Synthase,nNOS ELISA Kit
猪神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA KitPig Neuron-specific enolase,NSE ELISA Kit
猪神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA KitPig glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit
猪色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA KitPig pigment epithelium-derived factor,PEDF ELISA Kit
猪三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA KitPig Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit
猪乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA KitPig Lactoferrin,LF/LTF ELISA kit
猪乳酸脱氢酶(LDH)ELISA KitPig lactate dehydrogenase,LDH ELISA Kit
猪热休克蛋白70kDa蛋白1A(HSPA1A)ELISA KitPig Heat shock 70 kDa protein 1A,HSPA1A ELISA kit
猪热休克蛋白60(HSPD1/Hsp-60)ELISA KitPig 60 kDa heat shock protein,mitochondrial(HSPD1)ELISA kit
猪去乙酰化饥饿激素(dGHRL)ELISA KitPig deacylated appetite-regulating hormone,dGHRL ELISA kit
猪趋化因子配体28(CCL28)ELISA KitPig chemokine(C-C motif)ligand 28(CCL28)ELISA kit
猪前列腺素G/H合酶2(PTGS2)ELISA KitPig prostaglandin G/H synthase 2,PTGS2 ELISA kit
猪前列腺素F2α(PGF2α)ELISA KitPig Prostaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit
猪葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)ELISA KitPig Glucose transporter 2,GLUT2 ELISA Kit
猪皮质抑素/皮质醇稳定蛋白(CORT)ELISA KitPig cortistatin,CORT ELISA kit
猪皮质酮(CORT)ELISA KitPorcine Corticosterone,CORT ELISA Kit
猪皮质类固醇结合球蛋白(SERPINA6)ELISA KitPig Corticosteroid-binding globulin,SERPINA6 ELISA kit
猪凝血因子XIIIB链(F13B)ELISA KitPig Coagulation factor XIII B chain,F13B ELISA kit
猪凝血因子XIIIA链(F13A1)ELISA KitPig Coagulation factor XIII A chain,F13A1 ELISA kit
猪凝血因子X(F10)ELISA KitPig coagulation factor X,F10 ELISA kit
猪凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA KitPig coagulation factor ⅩⅢ,FⅩⅢ ELISA Kit
猪凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISA KitPig coagulation factor Ⅶ,FⅦ ELISA Kit
猪凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA KitPig coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA Kit
猪凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA KitPig thrombin-antithrombin complex,TAT ELISA Kit
猪钠-葡萄糖共转运载体1(SGLT1)ELISA KitPig sodium-glucose cotransporter 1,SGLT1 ELISA Kit
猪末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA KitPig terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit
猪缪勒管YZ物质/抗缪勒管激素(AMH)ELISA KitPig anti-Mullerian hormone,AMH ELISA kit
猪免疫球蛋白A(IgA)ELISA KitPig Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit
猪糜蛋白酶(CMA)ELISA KitPig chymotrypsin ELISA Kit
猪流行性乙型脑炎抗体(IgG)ELISA KitPig Japanese Encephalitis Antibody(IgG)ELISA Kit
猪磷脂酶A2(PLA2G1B)ELISA KitPig Phospholipase A2,PLA2G1B ELISA kit
猪磷酸激酶γ1(PHKG1)ELISA KitPig PHKG1 ELISA kit

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