超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法) RNA纯化是高品质的RNA纯化,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法)等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称:超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法) RNA纯化
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:ALH011
英文名:Ultra Pure Total RNA Fast Extraction Kit
本试剂盒适用于动植物组织、动植物培养细胞的总RNA提取,采用改进的异硫氰酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独特的RL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。
4.多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。
5.有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。
试剂盒组份:
组份 | 20次 | 50次 |
裂解液RL | 20ml | 50ml |
去蛋白液RE | 15ml | 25ml |
漂洗液RW | 5ml | 10ml |
RNase-free H2O | 10ml | 10ml |
吸附柱和收集管 | 20套 | 50套 |
储存条件:室温,有效期一年。(裂解液RL需4℃避光保存)
注意事项:
1. 次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2. 本试剂盒YZRNA酶效果,所有离心步骤如未加说明,均可在常温进行。
3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂氯*(代'仿'),使用前需要自备氯*(代'仿')。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb(18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时,如需稀释RNA样品应该用TE(PH 8),如果用水稀释后检测,由于一般水离子强度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。
7. 加入裂解液RL匀浆后,加氯*(代'仿')前,样品可在–60℃~70℃ 保存一个月以上。
8. 若提取细菌RNA,推荐细菌RNA提取试剂盒(目录号:ALH027和ALH029)。
操作步骤(实验前请先阅读注意事项)
提示:次使用前请先在漂洗液RW 瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 匀浆处理
a. 组织
将组织在液氮中磨碎,每50~100mg组织加1ml的裂解液RL后匀浆。组织样品容积不能超过RL容积的10%。
b. 单层生长的细胞
直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的RL溶解细胞,并用移液枪轻轻吹打混匀。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的RL量(每10cm2加1ml)。一般情况下,普通大小的细胞培养瓶,加入1ml的RL, 迅速轻摇使RL充分和瓶底所有细胞接触裂解细胞并灭活RNA酶,轻轻用移液枪反复吹打混匀。当RL量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
c. 悬浮生长的细胞
通过离心来沉淀细胞,小心弃上清。每5~10×106的动物细胞或植物细胞加1ml的RL。在RL试剂中用移液枪反复吹打来裂解细胞。在加入RL前应避免洗涤细胞,否则会增加mRNA降解的可能性。
2. 将匀浆样品剧烈震荡混匀,在15~30℃条件下孵育5分钟以使核蛋白体完全分解。
3. 可选步骤:4℃的条件下12,000rpm 离心10分钟,小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。当样品富含蛋白质、脂肪、多糖或是细胞外物质例如肌肉、脂肪组织或植物的块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。匀浆化后在2~8℃的条件下以12,000rpm离心10分钟,移除匀浆中不溶解的物质,余下的沉淀中包含有细胞外膜、多糖、以及高分子量DNA,而上层的超浮游物含有RNA。
4. 每1ml RL加0.2ml氯*(代'仿')。盖紧样品管盖,剧烈振荡15秒并将其在室温下孵育3分钟。
5. 于4℃12,000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加RL体积的50%,把水相小心转移到新管中(不要触碰中间层),记录水相体积。
6. 加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱中(吸附柱套在收集管内,若一次不能将全部溶液和混合物加入吸附柱中,请分两次转入吸附柱中。) ,12,000rpm离心45秒,弃废液,将吸附柱重新套回收集管。
7. 加500μl 去蛋白液RE,12000rpm 离心45 秒,弃废液。
8. 加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm 离心45秒,弃废液。
9. 重复步骤8一次。
10. 将吸附柱放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇YZ下游反应。
11. 取出吸附柱,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water,室温放置2分钟,12000rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟,或者另外再加30μl RNase free water,离心1分钟,合并两次洗脱液。洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是Z小体积Z好不少于30μl,体积过小降低RNA 洗脱效率,减少RNA产量。
本品别名:超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法)|超纯RNA提取试剂盒|RNA快速提取试剂盒|总RNA快速提取试剂盒|植物RNA提取试剂盒|动物RNA提取试剂盒|培养细胞RNA提取试剂盒
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·琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
编号:ALH096
英文名称:Agarose gel DNA Recovery Kit
规格:50次|100次|200次
本试剂盒适用于琼脂糖凝胶DNA的纯化回收。在高离序盐存在的情况下,DNA*(代'片')断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(100次):
平衡液——————————10ml
溶胶液DD—————————50ml×2
漂洗液WB—————————25ml
洗脱缓冲液EB———————15ml
吸附柱和收集管(2ml)-———100套
试剂盒特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化*(代'钠')和高氯酸盐,不YZ回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.溶胶液调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到结合效果,大大提高回收效率。
4.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变化很大也能将PH缓冲在结合范围内。
5.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯*(代'仿')等试剂,也不需要乙醇沉淀。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 溶胶液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 回收纯化的DNA*(代'片')段一般在100bp到40kb之间,过长、过短片段的回收效率迅速降低。
4. 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA*(代'片')断大小有关。一般1-15μg,100bp-5kb的DNA*(代'片')段,回收率可高达85%。
5. 切胶回收时,紫外灯观察对DNA*(代'片')段有损坏作用,应该尽可能使用能量低的长波紫外线,并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。
6. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保pH大于7.5, pH过低影响洗脱效率。用水洗脱,DNA*(代'片')段应该保存在-20℃。DNA*(代'片')段如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
储存条件:室温,有效期12个月。
超纯总RNA提取试剂盒(TRIzol法) RNA纯化