1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-2950(-)-α-蒎烯(-)-α-PineneCPM846095克
shgoy-29516,6-二甲基-2-亚甲基-二环[3.1.1]-庚烷β-PinenBRM8461025克
shgoy-2952甲硒丁氨酸Seleno-DL-methionineFMPM84611100克
shgoy-2953氨基甲酰肼SemicarbazideCPM8461210克
shgoy-2954苯磺酸钠Sodium benzenesulfonate植物细胞培养级M8461310克
shgoy-2955癸酸钠Sodium decanoateUSP级M846141克
shgoy-2956苯二甲酸氢钠Sodium hydrogen phthalateARM846155克
shgoy-2957草氨酸钠Sodium oxamateBR,98%M8461625克
shgoy-2958右旋泛酸钠Sodium D-pantothenateCP,97.5%M84617100克
shgoy-2959偏高碘酸钠Sodium periodateBR,99%M84618500克
shgoy-2960苯丙酮酸钠Sodium phenylpyruvateBR,90%M8461925克
shgoy-2961五水亚磷酸钠Sodium phosphite dibasic pentahydrateBR,95%M84620100克
shgoy-2962钼磷酸钠Sodium phosphomolybdate hydrateBR,95%M84621500克
shgoy-2963醋酸锶Strontium acetateBR,85%M84622100克
shgoy-2964二氟化锶Strontium fluorideAR,99.5%M84623500克
shgoy-29653,5-二甲氧基-4-羟基苯甲醛SyringaldehydeAR,99.7%M846245克
shgoy-29664-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酸Syringic acidBR,90%M846255克
shgoy-2967牛磺脱氧胆酸钠Sodium taurodeoxycholatBR,99%M846265克
shgoy-2968对甲苯磺酰氯PTSCCP,98%M846271克
shgoy-29692,3,5-三碘代苯甲酸TIBACP,99%M846285克
shgoy-2970三苯膦TriphenylphosphineBR,98%M8462910克
shgoy-2971去Rnase水Water-DEPC treatedBR,98%M8463025克
shgoy-2972乙二醇二甲基丙烯酸酯Ethylene dimethacrylateBR,98%M846311克
shgoy-2973叔丁基对苯二酚TBHQBRM8463225克
shgoy-2974乙二胺茶碱Aminophylline hydrateARM8463325克
CCK8 (Cholecystokinin-8)胆囊收缩素/缩胆囊素(八肽)
CD4CD4(抗原)
CD4(Rabbit Anti-Human Mouse rat CD4 Palyclonal Anti-body)CD4抗原
CD8CD8抗原
CD20(抗原)CD20(抗原)
CD25/IL-2RA(Imterleukm-2 Receptor alpha)CD25/白介素2-受体(抗原)
CD31(PECAM-1)血小板内皮细胞黏附分子-1(抗原)
CD34CD34(多肽抗原)
CD56/NCAM1 (Neural Cell Adhesion Molecule 1)神经细胞粘附分子1(抗原)
CEAcam8/CD67癌胚抗原相关细胞粘附分子8
CD68CD68抗原
CD117/c-kit/SCFR干细胞生长因子受体/细胞表面分化抗原(抗原)
DNA 电泳分子量标准 (50-500 bp)50 次包装CD133造血干细胞抗原(多肽抗原)
CD147/EMMPRIN(Extracellular matrix metalloproteinase inducer)CD147(抗原)
CD169/sialoadhesin(Sn)(Sialic acid-binding Ig-like lectin 1;Siglec-1)CD169抗原
CD272/BTLA(B and T lymphocyte attenuator)B 和 T 淋巴细胞衰减蛋白(抗原)
CDK2 (Cyclin-Dependent Kinase 2)周期素依赖激酶2(抗原)
CDK4(Cyclin Dependent Kinase 4)周期素依赖性激酶4(抗原)
CEA人癌胚抗原
ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2)毒蕈碱型乙酰胆碱受体M2(抗原)
Connexin-43(Cx43)间隙连接蛋白43(多肽片断抗原)
Connexin-45(CX45)间隙连接蛋白45(抗原)
Anti-Collagen IIII 型胶原(抗原)
CXCR1 (CXC-chemokine receptor 1)细胞表面趋化因子受体1抗原
COX-2 (Prostaglandin-endoperoxide synthase-2)前列腺素氧化环化酶2(抗原)
c-phycocyanin(C-PC)C-藻蓝素(藻蓝蛋白)
CTGF (connective tissue growth factor)结缔组织生长因子(多肽抗原)
DNA 电泳分子量标准 (50-500 bp)50 次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCRYZ物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。