脑膜炎球菌奈瑟菌诊断血清
广州健仑生物科技有限公司
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脑膜炎球菌奈瑟菌诊断血清
【储藏条件】
2~8℃避光保存,在标明的有效期内使用。
【有效期】
24个月
【产品名称】
通用名:脑膜炎奈瑟菌诊断血清英文名:antisera for N.meningitidis
【产品说明】
本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6个常见血清QUN(serogroup)脑膜炎奈瑟菌的血清群鉴定,将相应血清群脑膜炎奈瑟菌制备灭活抗原,免疫家兔所得,血清产品经免疫吸附去除了非特异性凝集成分,具有效价高,特异性强的特点。
【规格】
每种血清群1瓶,每瓶2ml,均为使用液。
【使用方法】
1.产品在使用前,由冰箱拿出,恢复温度到室温后使用。
2.样品分离培养物,经镜检和生化鉴定,确定为脑膜炎奈瑟菌后,再进行血清分群检测,如果未能确定为脑膜炎奈瑟菌,不宜直接进行血清凝集检测,以免产生假阳性结果。
3.待鉴定细菌在血平板或巧克力平板上,5% CO2,培养48小时。
4.用酒精擦拭玻璃片。
5.用蜡笔或防水笔将玻璃片分为8个方格。
6. 在玻片每个方格的下半部分,用移液器加5%的溶液(基于生物安全目的)。
7. 用无菌或一次性10μl接种环挑取BAP平板上过夜培养的细菌菌落。
8. 在玻片上将细菌与5%的溶液混匀,混匀后的液体应该不透明,在加抗血清前应保持细菌悬液不干燥。
9. 在玻片的上方加10μl血清群特异的抗血清,同时在阴性对照侧加BS或者生理盐水。
10. 缓慢的混合细菌悬液和抗血清,使上部的抗血清和下部的细菌悬液充分混合1-2分钟。不要做旋转晃动,以免不同血清群的血清会相互混合污染。
11.在灯光下,黑暗背景条件下观察结果。1-2分钟内呈2+及以上凝集现象为阳性,1-2分钟内呈现2+以下凝集现象为阴性。如果过了2分钟,才发生的凝集反应按阴性处理。
【凝集反应的强度等级】
当抗血清与细菌接触,会引起凝集反应,使细胞(细菌)凝集或呈簇,细胞(细菌)上清液变得清亮,细胞悬液浓度或使用的抗血清浓度不同,会产生不同的强度的凝集反应,见图示
4+ 所有的细胞都发生凝集,细胞悬液清亮。
3+ 75%的细胞发生凝集,细胞上清略微浑浊不清。
2+ 50%的细胞发生凝集,细胞上清略微浑浊不清。
1+ 25%的细胞发生凝集,细胞上清略微浑浊不清。
+/- 少于25%的细胞发生凝集,可见有颗粒状的成分。
0 没有肉眼可见的凝集,上清悬液浑浊、平滑。
【血清群确定】
1. 1-2分钟内,出现3+或4+凝集为阳性反应(强阳性反应)。对于B群脑膜炎奈瑟菌来说,如果出现2+及以上的凝集则可认为阳性。
2. 阴性反应是+/-、1+ 或 2+(弱凝集)的凝集程度。
3. 当菌株仅与一种抗血清出现凝集,但和生理盐水不凝集时才能鉴定为该种血清型。
4. 如果不能确定血清群,菌株记为不能分群脑膜炎奈瑟菌(NG)。
5. 关于不能分群脑膜炎奈瑟菌(NG)菌株
6. 在生理盐水中凝集,无论与任何抗血清发生强反应,都应标记为自凝菌。
7. 在生理盐水中不自凝,和多种血清出现凝集,记为NG。
8. 不和生理盐水凝集,也不和任何一个血清凝集也记作NG。
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( MOB:杨永汉)
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