慢病毒载体构建与包装_详细资料

产品信息

提供商：上海市麒盟生物科技有限公司服务名称：慢病毒载体构建与包装

个性化定制，最快 10 天时间发货麒盟生物慢病毒包装简介
慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 1 型病毒）为基础发展起来的基因ZL载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、
长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA 干扰、microRNA 研究以及活体动物实验中。慢病毒（Lentiviruses）属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因ZL的转移载体。HIV（Human immunodeficiency virus）、EIAV（Equine infectious anemia virus）、FIV （Feline immunodeficiency virus）、 SIV（Simian immunodeficiency virus）。其中研究最多最为透彻的是HIV。
重组慢病毒的产生：瞬时转染法，即将包装结构和载体结构瞬时共转染法如293T 高表达细胞系而产生重组慢病毒。此法非常成功，大多实验室采用此法。包膜质粒、包装质粒与载体质粒共转染293T细胞直接产生生产细胞。ZH重组慢病毒分泌到培养基中进行培养而得到大量载体慢病毒。

技术应用
体外建立稳定表达或沉默目的蛋白的细胞株，体内用于基因的ZL、动物模型的制备等。

实验流程

麒盟生物服务项目
上海麒盟生物提供慢病毒载体构建、RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和干扰
慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建的个性化定制服务，同时提供
相对应的细胞技术服务。

麒盟生物慢病毒包装实验流程
1.慢病毒过表达质粒载体的构建
设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，采用 PCR 技术(采用高保真 KOD 酶，3K 内突变率为 0%)从模板中（cDNA 质粒或者文库）调取目的基因
CDS 区（coding sequence）连入 T 载体。将 CDS 区从 T 载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。
2.慢病毒干扰质粒载体的构建
合成 siRNA 对应的 DNA 颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体。
3.miRNA 载体构建从 Genomic 中调取基因相应的 Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。
4.慢病毒载体的包装与浓缩纯化制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载
体质粒（两质粒包装系统），三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染 293T 细胞，转染后 6 h 更换为完全培养基，培养 48 和 72h 后，分别收集富含
慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。

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