稳定转染细胞系构建服务

稳定转染细胞系构建服务

质量保证：可对转染细胞的外源基因表达进行严格鉴定，包括RNA水平和蛋白水平
筛选后可以得到稳定表达外源基因的细胞克隆：质粒DNA整合到染色体上；可使用慢病毒载体转导的实验条件，理论上可以
确保每个细胞只有单拷贝插入。偏向于转录活跃区段，且整合后非常稳定，在传代100次后仍然保留在宿主基因组中，可以克
服使用非病毒载体转染方法构建稳定株，成功率低，稳定性差，稳定克隆株易出现不均一(含有非整合细胞)等缺点。
不同选择：使用混合稳定株或者获得多个不同单克隆稳定株

原理
通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因被导入细胞后，一般在转染后48小时，靶基因即在细胞内表达。如若建
立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，Z常用的直核表达基因载体的
标志物有潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。筛选后可以得到稳定表达外源基因的细胞克隆，这就是稳定转染。稳定
转染的质粒DNA整合到染色体上，使得转染的细胞可长期表达。哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白质的正确折叠，提
供多种翻译后加工功能，因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面Z接近于天然的高等生物蛋白质分子。

服务流程
1) 客户提供：构建好的外源基因载体；待转染的细胞系(1E6个细胞，
可传代，倍增时间小于48小时)；关于细胞培养条件的说明
2) 筛选浓度测定：以10 - 14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度
3) 细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种
细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞应达到60% - 80%
覆盖
4) 细胞转染；抗生素筛选；鉴定筛选结果
5) 我们提供：构建好的稳定细胞系及相关的外源基因表达分析