同位素相对标记与定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)
iTRAQ技术是由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation,ABI) 于2004年研发的一种多肽体外同位素相对标记于定量技术。该技术采用4种或8种同位素编码的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,尔后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或含量,是近年来差异蛋白质组学常用到的高通量筛选技术。
原理:
iTRAQ试剂包含八种不同的胺活性试剂。每种胺活性试剂与水解后肽段结合。胺活性试剂包含报告基团和平衡基团。
iTRAQ技术流程图:
优点:
1、定量敏感、反应速度快。
2、标记完全,标记效率高达 97%以上。
3、 较高的重复性,能简化谱的复杂程度、提高离子强度。
4、可对多达八种不同样本同时进行定量分析,提高了实验通量。
5、定性与定量同时进行。
6、一个蛋白质有多个肽段被鉴定,提高了定量的准确性。
7、二级图谱质量更好,产生很好的y、b离子系列,蛋白序列覆盖率提高,鉴定结果更可靠
应用:
1、同时标记8个样品,一次实验实现多达8个样品的蛋白质鉴定和定量。
2、可以进行多个时间点蛋白质组动态变化的监测。
3、可以分析详细分期/型的临床疾病样本,并可设计样本重复,甚至可以进行个体样本的研究。
4、可标记修饰后的氨基酸,因此可以对磷酸化蛋白等翻译后修饰蛋白进行定性定量研究。
5、iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白,还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
送样须知样品要求:
客户只需提供冻存在液氮或-80℃冰箱保存的原始样本,由我们提取蛋白,以保证实验前后试剂的兼容和实验的质量。样本提供量的多少,需要根据蛋白提取预实验来确定。
寄送须知:
样品需用干冰保存,上门送样或快递到公司。
我公司iTRAQ技术应用同时具有高分辨率、高质量准确度、高灵敏度、高通量、一次实验同时定性定量的AB SCIEX TripleTOF™ 5600质谱系统。