HLAmP人肺巨细胞系 专业技术指导 专注复苏

HLAmP人肺巨细胞系 专业技术指导 专注复苏
BJ细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
JF-305细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
MPVECs细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个啊是非常考究你的功夫的！细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度啊，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理啊。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活去死的致命点。像Caco-2细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到70%左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代。不能再拖了。关于换液传代时候洗瓶的问题。对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清1640去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用1640培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。先补充这么多，还会后续更新。再补充一点：传代时PBS洗是很重要的一步，Z近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置10-15分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。
HEK293A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
253J细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
MeT-细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
葡萄糖天冬酰胺琼脂，英文名：Glucose Asparagine Agar(Waksman, 1961)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定
硅酸盐细菌培养基，英文名：Silicate Bacteria Medium，用途：含琼脂，用于硅酸盐细菌的培养
巴尔斯氏培养基基础，英文名：Baar,s Medium for Sulfate Reducers，用途：用于脱肠球菌等盐还原细菌的培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
MS培养基(1/2蔗糖)，英文名：Murashige & Skoog Medium (1/2 Sucrose)，用途：含琼脂，蔗糖15g/L，用于植物组织培养
细胞形态特性：详见细胞说明书
甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP)，英文名：Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin agar Base，用途：用于蜡样芽胞杆菌计数和分离,每100ml添加50%卵黄盐水悬液和多粘菌素B溶液各1支
番茄汁肉汤，英文名：Tomato Juice Broth，用途：用于酵母菌和乳酸菌等耐酸菌的培养
OCI-LY19细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HUV-EC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
hUC-MSC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人Sestrin人3蛋白(SESN3)ELISA试剂盒，英文名：Human SESN3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人ZX粒外周物质1(PCM1)ELISA试剂盒，英文名：Human PCM1 ELISA Kit，规格：48T/96T
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(组酸缺陷/ SC-His)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium without Hist，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞培养中支原体污染的经验分享：支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体(M.orale)、精酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)，为牛源性。以上是Z常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体Z突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体Z有YZ活性及常用于支原体感染ZL的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些喹诺酮;其他类抗生素如基糖苷类、霉素对支原体有较小YZ作用，所以常不用来作为支原体感染的化学ZL剂。
10%化钠胰蛋白胨大豆肉汤，英文名：10% Sodium Chloride Tryptone Soy Broth，用途：用于金黄色葡萄球菌的增菌
抗生素检测用培养基Ⅱ，英文名：Antibiotic Examination Medium Ⅱ，用途：用于乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验
假单胞菌分离琼脂，英文名：Pseudomonas Isolation Agar，用途：用于假单胞菌的检验,每升培养基中添加20ml甘油
M-绿色酵母菌和霉菌肉汤，英文名：m-Green Yeast and Mold Broth，用途：用于饮料中酵母菌和霉菌的检测
LX2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EL4细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
Hurt-78细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Clone9细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
WTRL1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PtK1(NBL-3)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
大鼠微纤丝关联蛋白4(MFAP4)ELISA试剂盒，英文名：MFAP4 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠apelin 13(AP13)ELISA试剂盒，英文名：Mouse AP13 ELISA Kit，规格：48T/96T
人25羟基维生素D3(25OHVD3)ELISA试剂盒，英文名：Human 25OHVD3 ELISA Kit，规格：48T/96T
山梨醇麦康凯琼脂(CT-SMAC琼脂基础)，英文名：Sorbitol MacConkey Agar (CT-SMAC Agar Base)，用途：用于O157菌选择性分离,每100ml中添加亚碲酸钾溶液和头孢克肟溶液各1支,组成改良山梨醇麦康凯琼脂
脱弧菌培养基基础，英文名：Desulfovibrio Medium Base（DSMZ Medium 63），用途：用于脱弧菌的培养，每100ml添加1支脱弧菌培养基添加剂
去氧胆酸盐琼脂(DC)，英文名：Desoxycholate Lactose Agar，用途：用于肠道致病菌及大肠杆菌的选择性分离和计数
HS578T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
SUIT-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW 626细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒，英文名：Human BAFF ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠碱性胎儿蛋白(BFP)ELISA试剂盒，英文名：BFP ELISA Kit，规格：48T/96T
人主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHC I/AgB I/H-1 I)ELISA试剂盒，英文名：Human MHC I/AgB I/H-1 I ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠类固醇5α还原酶2(SRD5α2)ELISA试剂盒，英文名：SRD5α2 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
大鼠血小板反应蛋白解整合素金属肽酶1(ADAMTS1)ELISA试剂盒，英文名：ADAMTS1 ELISA Kit，规格：48T/96T
酪酸琼脂培养基基础，英文名：ISP Medium 7( Tyrosine Agar Medium Base)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定,每200ml添加3支甘油
解脲支原体肉汤基础，英文名：Ureaplasma urealyticum Broth Base，用途：用于解脲支原体培养,需添加尿素、小牛血清及YJ剂
SB肉汤，英文名：Super Broth，用途：用于基因工程大肠杆菌的高密度发酵
肠毒素产毒培养基(不含琼脂)，英文名：Enterotoxin toxin-producing medium without Agar，用途：用于葡萄球菌产毒素检验
葡萄球菌培养基110，英文名：Staphylococcus Medium 110，用途：用于通过明胶、甘露醇发酵试验对葡萄球菌的分离
A9细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EMT-6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
BRL-3A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2122[H2122]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
结晶紫中性红胆盐琼脂(含葡萄糖和乳糖)，英文名：Violet Red Bile Agar with Glucose and Lactose，用途：用于肠道菌选择性分离和计数
NCI-H711[H711]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1238[H1238]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EB1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长 ；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代
传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。【操作步骤】1)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液；2)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜；3)置37℃孵箱或室温(25℃温度)下进行消化，2~5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化；4)吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化；5)使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞；6)用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中进行培养；7)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2～3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。【注意事项】1)掌握好细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤；2)掌握好消化浓度，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。
LS 174T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。