北京高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)大量库存促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)大量库存促销在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：北京高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)大量库存促销
品Pai：百奥莱博
编号：RFT151
英文名：High Molecμlar Weight Native Electrophoresis Protein Marker
产地：国产|进口
规格：20次(100μl)
本产品是5种高纯蛋白质干粉混合物，总蛋白含量为250μg。具体蛋白含量如下：

 

蛋白名称	分子量(kD)	蛋白来源	蛋白含量(μg)
Thyroglobμlin	669	porcine thyroid	76
Ferritin	440	equine spleen	50
Catalase	232	bovine liver	36
Lactate dehydrogenase	140	bovine heart	48
Albumin	66	bovine serum	40

分子量范围为66kD-669kD，经过非变性电泳后，用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带。

使用说明：
1. 取100μl非变性蛋白上样缓冲液(1×)加入到蛋白干粉混合物中，彻底混匀融化后，-20℃贮存。
2. 常温融化后，彻底混匀，上样电泳。
注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
3. 电泳结束后，染色，观察结果。
注：使用银染时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，可以适当降低Marker上样量，一般稀释50倍。

注意：
1. 本蛋白Marker不适用于变性蛋白电泳(SDS-PAGE)，因为在SDS存在下，含有多个亚单位的蛋白会不同程度解聚。
2. 在非变性条件下，蛋白的迁移与蛋白的电荷、蛋白形状以及蛋白分子量都有关。因此，在一种凝胶浓度下使用本Marker不能精确估计出目的蛋白的分子量。非变性电泳中，蛋白分子量的确定应该是在不同凝胶浓度下，确定出蛋白的Rf值，绘制出凝胶浓度对Rf的曲线从而判定蛋白的分子量。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

我公司的北京高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)大量库存促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·2×SYBR qPCR MasterMix
编号：RFT094
规格：1ml|5×1ml|20×1ml
本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。已经将 Hot-Start DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液和 SYBR? Green I 等试剂预混成一种适合 Real Time PCR反应检测用 2×MasterMix试剂，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板、引物和水，便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对目的基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。以50μl qPCR反应体系为例，每次使用25μl 2×MasterMix，1ml可做40次 50μl qPCR反应。

使用方法：
1、冰浴中彻底融化2×qMasterMix，彻底混匀后快甩离心将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

	50μl反应体系	20μl反应体系	终浓度
2×qPCR MasterMix	25μl	10μl	1×
上游引物 10μM	1μl	0.4μl	0.2μM
下游引物 10μM	1μl	0.4μl	0.2μM
ROX Slolution I or II(50×)	1μl or 不加	0.4μl or 不加	x
模板	×μl	xμl	10pg-100ng
水	补至50μl	补至20μl

3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、检测片段大于300bp，qPCR仪上推荐执行以下程序(三步法)：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	95℃	10min*	1
变性	95℃	15sec	40
退火	55℃	30sec
延伸	72℃	30sec

检测片段小于300bp，qPCR仪上推荐执行以下程序(两步法)：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	95℃	10min*	1
变性	95℃	15 sec	40
退火和延伸	60℃	60 sec

注：由于本MasterMix中的Hot-start DNA聚合酶是经过化学修饰封闭的，初始变性95℃ 10分钟是必须的，时间过短会降低酶的活性。

实验结果分析
反应结束后加做融解曲线，以区分扩增产物及引物二聚体。根据扩增曲线和融解解曲线结果可进行PCR定量标准曲线的制作。

注意事项
1、本制品中不含内参染料ROX，ROX染料单独供应。客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX内参染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2、本制品含SYBR Green I，强光下易分解，使用时避免长时间强光照射本制品。
3、建议在冰上配制qPCR反应液，再放入qPCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景。
4、-20℃下保存时间较长，有微量沉淀产生，充分混匀后不影响使用。本制品已经优化了反应缓冲液中的Mg2+浓度，无需再调节Mg2+浓度。
5、模板DNA：用本产品，cDNA、基因组DNA、质粒DNA、病毒DNA等都可作为模板。在添加DNA模板时请注意模板量对PCR扩增的影响。本产品建议添加量为：cDNA添加量不应超过总反应体系的10%；基因组DNA为模板时，为避免在高浓度区域出现线性差的情况，请注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作为PCR模板，添加时请以300ng为上限；由于质粒DNA浓度和拷贝数很高，在添加PCR模板之前进行稀释梯度试验，以便确定合适的质粒DNA拷贝数。
6、引物：
建议每条引物工作浓度200 nM～800 nM；为得到高灵敏度定量性的数据，引物的设计非常重要。以下列举了设计引物时需注意的一般事项。
a.引物长度请设定为18bp～30bp、GC含量为40%～65%；
b.扩增片段一般小于300bp，如可能请尽量设定在80bp～150bp。过长的片段容易导致扩增效率降低；
c.如设计mRNA为目的片段的引物，设计应尽量横跨内含子，以防止基因组DNA的扩增而引起假阳性；
d.请尽量选择Tm为65℃～67℃；
e.A、G、C、T整体分布尽量均匀。不要有部分的GC rich或AT rich(特别是3"端)。避开T/C(Polypyrimidine)或A/G(Polypurine)的连续结构；
f.避开引物内部或两条引物之间有3个碱基以上的互补序列。二条引物间的3"末端避开有2个碱基以上的互补序列；
g.引物设计完成后要使用BLAST检索确认引物的特异性。
此外，引物的纯化纯度对反应特异性有很大的影响。经过一般纯化、纯度较低的引物荧光强度散乱，容易产生非特异性产物，致使熔解曲线出现杂峰。请尽可能使用HPLC级别纯化，至少要用经Cartridge(OPC)级别以上纯化的引物。
7、对照设计：
a.No template control(NTC)：在qPCR反应体系中仅仅缺少模板。用以检测有无二聚体和试剂有无污染。
b.Reverse Transcripase control：用以评估逆转录反应中有无基因组DNA的污染。在逆转录反应中仅仅不含有逆转录酶。

常见问题及处理：

问题	可能原因	推荐的解决方法
无扩增曲线且无扩增产物(凝胶电泳)	反应体系中有PCR反应YZ剂	更换或纯化模板DNA。
	引物设计不合理	重新设计、合成引物。
	逆转录产物体积过量	减少逆转录产物量以不超过反应体系的10%。
	加样错误或有试剂未加	检查是否加了所有的所需试剂。
	引物的降解	通过PAGE电泳检测引物完整性。
	退火温度不正确	优化退火温度。
无扩增曲线但有扩增产物(凝胶电泳)	qPCR仪设置不正确	检查dye selction，reference dye是否选择正确
	失效的荧光检测	荧光检测应在PCR循环的退火/延伸阶段。
	荧光PCR仪问题	参考qPCR仪器说明书
阴性对照(NTC)有扩增曲线
	反应体系中有污染	qPCR片段较小，极易造成环境中气溶胶污染。如果融解曲线分析，解链温度和目的片段相同，凝胶电泳中NTC中的片段大小和目的片段相同，极有可能是反应体系中某一或某些试剂污染所引起的。建议换至没有污染源的环境进行PCR体系的配制。
	引物二聚体	进行溶解曲线分析，如果扩增曲线的解链温度小于80℃，凝胶电泳片段大小和目的片度不符。请重新设计引物。
		提高退火温度3℃。
PCR效率高于110%(斜率>-3.1)	有非特异性扩增	溶解曲线分析非特异性扩增；优化引物设计
PCR扩增效率低于90%(斜率<-3.6)	反应体系中有PCR反应YZ剂	更换或纯化模板DNA
	PCR扩增条件不合适引起扩增效率降低。	确认引物浓度。注意qPCR Master Mix是否失效。
	引物设计	重新设计引物，避免扩增区域的DNA二级结构。
实时荧光曲线线性不好	模板DNA含量较低或过高	应调整样品的DNA浓度。
	模板DNA中含有YZPCR扩增反应的物质	对模板DNA进行纯化或更换模板。
	质量不好的逆转录试剂盒合成的cDNA，逆转录反应液中所含的物质可能YZPCR反应。	请降低样品浓度，或将样品纯化后再进行反应。建议使用品Pai质量较好的cDNA合成逆转录试剂盒。
CT值高于预期值	加入的模板量太少	适当增加模板量。
	样品被降解	检查样品的完整性。
	引物不合适	重新设计合成引物。
CT值低于预期值	加入了过多的模板	减少模板量。
	PCR产物太长	一般采用100-150bp的产物长度，一般不超过500bp
CT值的标准差>0.16	取样不准确	每种样品的反应混合液单独配制，充分混匀；
		qPCR之前要离心，管壁不要沾有反应液。
ΔRn值太小	PCR效率太低	优化PCR反应条件。
	目标模板数太低	增加模板量。
扩增曲线的荧光信号弱，或扩增曲线呈锯齿状	ROX添加量太大	使请根据ROX使用方法和使用的PCR仪进行确定ROX的添加量。
	荧光校正错误	请联*(代"系")PCR仪器工程师或参照PCR仪器的使用说明书，进行本底和荧光校正。
	PCR的延伸时间过短即荧光读取时间不充分，荧光收集不能充分完成。	适当增加延伸时间。
	以少于PCR仪器标准条件的反应体积进行扩增，荧光收集量的误差会增大	应增加反应体积以满足PCR仪器标准。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期半年。


北京高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)大量库存促销关键词：高分子量非变性电泳蛋白质Marker,RFT151,High Molecμlar Weight Native Electrophoresis Prote,66～669 kD,高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)


·JM110化学感受态细胞
编号：RFT114
英文名称：JM110 Competent cell
规格：20×100μl
本公司生产的JM1110感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

基因型：rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]

产品特点：
1、JM 110 是一种甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，使DNA 不被甲基化，使用其转化所得到的质粒DNA，可被对dam、dcm 甲基化敏感的限制酶切割。
2、只适用于转化质粒DNA。
3、细胞具有硫*(代"酸")链霉素(Strr) 抗性。

操作方法：(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置45秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12—16小时。

注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200—300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项：
1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到ZD。

储存条件：-70℃，有效期6个月。


北京高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)大量库存促销关键词：高分子量非变性电泳蛋白质Marker,RFT151,High Molecμlar Weight Native Electrophoresis Prote,66～669 kD,高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)

2-*磺酸* Guar gum 532-02-5
ARB10502 人白细胞介素11(IL-11)尿液中含量检测 Human interleukin 11,IL-11ELISA KIT
BL0946 生物素化兔抗鸡IgG抗体
黑色素清除液   2×100ml
ARB11400 人神经科粒素(NG/NRGN)代做ELISA实验 
ARB13166 小鼠热休克蛋白60(Hsp-60)elisa检测操作说明书 Mouse heat shock protein 60,hsp-60 ELISA KIT
BL1386 SABC小鼠IgG-FITC/POD双标kit
SJ0005 熊果酸(标准品) UDCS
ARB12384 大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)Elisa定量检测 Rat tumor necrosis factor α,tnf-α ELISA KIT
硫代氧化型辅酶Ⅰ Ethyl stearate 4090-29-3
BL0826 HRP标记兔抗HRP抗体
2,1,3-*并噻二唑 DEP 273-13-2
F030442 胶体金标记小鼠抗鸭IgY(IgG)抗体 Monoclonal Mouse Anti-Duck IgY*GOLD
F020209 兔抗小鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Mouse IgG
*化*溶液(5mol/L)   500ml
ARB11386 人活化蛋白C(APC)Elisa方法检测 Human activated protein c,apc ELISA KIT
ARB13997 猪瘦素(LEP)elisa检测 Porcine leptin,lep ELISA KIT
miRcute miRNA 提取分离试剂盒 
ARB11038 人环孢素A(CsA)检测服务 Human cyclosporine a,csa ELISA KIT
ARB12496 大鼠神经型NO合酶(nNOS)代做ELISA实验 Rat nitric oxide synthase,nos ELISA KIT
ARB14125 人附睾蛋白4(HE4)血清中含量检测 
F050318 牛IgG抗体 Bovine IgG

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购北京高分子量非变性电泳蛋白质Marker(66～669 kD)大量库存促销。