DNA RACE 基因组调取技术服务

RACE

RACE(rapid-amplification of cDNA ends)，即cDNA末端快速克隆技术。RACE基于PCR技术基础之上，先由RT-PCR从RNA中获取cDNA片段，再通过设计引物与PCR向两端延伸扩增从而获得完整的3'端或5'端序列，z是一种从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3’末端的有效方法。相比于其他获得新基因的方法，RACE原理简单、无需建立文库、快速廉价，正受到越来越多科研工作者的重视。

但在实际实验操作过程中，做好RACE并不容易。RNA样品的提取、酶反应的质量、扩增效率的高低都会直接影响结果，而且RACE试剂盒价格也稍贵。成功的RACE需要对整个实验过程有总体的把握，的反应条件也是不断摸索出来的。

本公司具有多年RACE经验，总结归纳出了一系列的实验心得与技巧，可以高灵敏度、高特异性地扩增稀有RNA样品或低丰度基因。RACE作为本公司的核心技术项目之一，我们有信心能为您获得几乎任何一个cDNA的全长序列。

 

 

3'末端RACE（3’RACE System clontech）

利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结合位点，以连有SMART寡核苷酸序列通用接头引物的Oligo（dT）30MN作为锁定引物反转录合成标准链cDNA。然后用一个基因特异引物作为上游引物，用一个含有部分接头序列的通用引物作为下游引物，以cDNA链为模板，进行PCR循环，把目的基因3' 末端的DNA片段扩增出来。（图1）

 

 

5'末端RACE （5’RACE System，Ver 2.0 Invitrogen）  

利用一条基因特异性反转录引物，在反转录酶的作用下合成cDNA链，将RNA-DNA杂合链中的RNA降解纯化后，利用末端转移酶在cDNA链的3’端加入PolyC尾巴，然后利用锚定引物和一条基因特异性引物扩增。

 

 

 

 

本公司提供的RACE服务步骤如下：

1. 总RNA的提取

我们将使用TRIzol法来提取实验材料的总RNA，这一步可由您自己完成。

2. cDNA的合成与检测

反转录生成cDNA的链，再生成cDNA第二链，电泳检测cDNA的产量。

3. RACE 扩增

我们使用锚定PCR（AnchoredPCR）与巢式PCR（Nested PCR）相结合的方法，用Clontech和Invitrogen公司的试剂盒分别进行3'末端和5'末端RACE。

4. RACE产物检测测序

将RACE产物TA克隆并进行测序。

 

实验样品：

提取Total RNA的材料：动植物组织，细胞或菌液（保证材料充足）；

或者由您直接提供总RNA： 3’RACE：Total RNA>15μg； 5’RACE：Total RNA>25μg。

 

序列信息：

大于200bp的已知序列(请注明已知序列的5’端及3’端)：如果已知序列比较短，建议先进行3’RACE再进行5’RACE，以提高实验的成功率；

实验数据和参考文献：这将会帮助我们更好地理解您的实验背景，有利于实验的顺利进行。

 

实验报告：引物信息 实验过程 PCR产物照片；

测序结果：测序彩色波形图、测序方向图、碱基序列图；

实验产物：引物、测序用质粒（限产生克隆测序的情况）。

 

1. 请保证材料或者总RNA新鲜，如果基因的含量较低或者未知序列较长，样品量需相应增加；

2. 我们会根据已知序列进行特异性扩增，如果得不到目的序列或为非目的基因的序列，我们将停止实验并收取实验成本费用；如果得到序列与您提供的序列有个别碱基不符，我们在征求您的意见后决定是否进行RACE实验；

3. 我们将设计跨内含子引物PCR检验基因表达水平，如果经验证，样品中基因表达含量低时，我们将与您沟通后，决定下一步实验使用的方法；

4. 对于原核生物RNA 我们仅进行5' RACE。